本文關(guān)鍵詞：牛輪狀病毒VP6蛋白的原核表達(dá)及其多克隆抗體的制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的原核表達(dá)牛輪狀病毒(rotavirus,RV)VP6蛋白,并制備其多克隆抗體。方法根據(jù)Gen Bank中登錄的牛RV UK株VP6基因序列(X53667.1)設(shè)計一對特異性引物,RT-PCR擴(kuò)增牛RV UK株VP6全長編碼區(qū)片段,克隆至載體p ET-28a,構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-28a-Bo-RV-VP6,轉(zhuǎn)染至E.coli Rosetta(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá),重組蛋白進(jìn)行SDS-PAGE和Western blot分析。將重組蛋白與弗氏佐劑混合后免疫豚鼠,共免疫3次,每次間隔2周,末次免疫后2周,經(jīng)心臟采血,分離血清,制備VP6多克隆抗體,Western blot法檢測其與牛RV的反應(yīng)原性。結(jié)果經(jīng)雙酶切和測序鑒定,重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-28a-Bo-RV-VP6構(gòu)建正確。重組蛋白以包涵體的形式表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物分別為43 000、34 000、27 000和15 000 4種不同相對分子質(zhì)量的重組蛋白,純化后純度可達(dá)95%以上,可與牛RV陽性血清發(fā)生特異性反應(yīng)。制備的VP6蛋白多克隆抗體效價1∶7 000,且可識別RV天然VP6蛋白。結(jié)論原核表達(dá)了牛RV VP6蛋白,并制備了抗VP6多克隆抗體,為后續(xù)RV疫苗效力評價及RV侵入機(jī)理等方面的研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 牛輪狀病毒 VP基因 原核細(xì)胞 基因表達(dá) 多克隆抗體
【基金】：黑龍江省自然科學(xué)基金(C2015042,QC2013C028) 國家自然科學(xué)青年基金項(xiàng)目(31502098,31201909) 黑龍江博士后科研啟動資助項(xiàng)目(LBH-Q13134)
【分類號】：S852.4;R392
【正文快照】： A群輪狀病毒(rotavirus,RV)是造成世界范圍內(nèi)幼齡動物及嬰幼兒重度胃腸炎的主要病原體之一,給畜牧業(yè)發(fā)展和人類健康造成巨大危害[1]。RV屬于呼腸病毒科,基因組含有11條分節(jié)段的雙鏈RNA,共編碼6個結(jié)構(gòu)蛋白與6個非結(jié)構(gòu)蛋白[2]。RV粒子為3層衣殼結(jié)構(gòu),具有感染性RV粒子最外層衣殼

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 張二芹;馬強(qiáng);王會巖;閆明田;;豬輪狀病毒VP6基因的原核表達(dá)載體構(gòu)建和表達(dá)[J];河南農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年05期

2 邊亞娟;林長水;王玉玲;李一經(jīng);;抗豬輪狀病毒VP6單克隆抗體的制備與鑒定[J];東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2006年04期

3 陳淑紅,李一經(jīng),師東方;豬輪狀病毒地方株JL94株VP6基因的克隆及其在大腸桿菌中的表達(dá)[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2004年04期

4 ;[J];;年期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 陳淑紅;豬輪狀病毒地方株的分離鑒定及其VP6基因的克隆與原核表達(dá)[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2003年

  本文關(guān)鍵詞：牛輪狀病毒VP6蛋白的原核表達(dá)及其多克隆抗體的制備，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：478287