本文關(guān)鍵詞：藍(lán)氏賈第鞭毛蟲α-8賈第素特異性優(yōu)勢抗原表位肽的抗原性分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的篩選藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(簡稱賈第蟲,Giardia lamblia)α-8賈第素(α-8 giardin)的優(yōu)勢抗原表位肽,并分析其抗原性。方法采用DNAstar、Biosun軟件及CLUSTAL W軟件進(jìn)行生物信息學(xué)分析,篩選出賈第蟲α-8 giardin的3個優(yōu)勢抗原表位肽,即G1(7~17 aa)、G2(30~40 aa)和G3(296~306 aa);3個抗原表位肽分別與鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)偶聯(lián)后(KLH-G1、KLH-G2、KLH-G3)免疫雌性青紫藍(lán)家兔(每組2只),分別行背部皮下多點(8~10點)免疫注射,首次免疫各偶聯(lián)蛋白0.5 mg/只(每點100μl)。分別于首次免疫后14、21、28 d進(jìn)行加強(qiáng)免疫(各偶聯(lián)蛋白0.2 mg/只),于每次免疫前進(jìn)行兔耳緣靜脈采血,末次加強(qiáng)免疫后7 d頸動脈取血(各50 ml)。用間接ELISA檢測3種(KLH-G1、KLH-G2和KLH-G3)免疫抗血清中Ig G抗體效價;蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)分析3種免疫抗血清與重組蛋白r Giardin的抗原性。結(jié)果利用生物信息學(xué)相關(guān)軟件篩選出的賈第蟲α-8 giardin 3個候選抗原表位肽分別與KLH偶聯(lián)后獲得3個偶聯(lián)蛋白(KLH-G1、KLH-G2、KLHG3),經(jīng)純化后蛋白濃度分別為0.66、0.95和0.25 mg/ml。分別于加強(qiáng)免疫家兔后7 d,ELISA檢測結(jié)果顯示,3種(KLH-G1、KLH-G2、KLH-G3)免疫抗血清的抗體效價分別為1:12800,1:51200,1:51200;SDS-PAGE分析結(jié)果顯示,經(jīng)純化后的3種抗血清均在相對分子質(zhì)量(Mr)約36 000處出現(xiàn)特異性的清晰條帶,無其它雜帶。Western blotting分析結(jié)果顯示,3種抗血清均可特異性識別重組蛋白r Giardin。結(jié)論篩選出的賈第蟲α-8 giardin 3個優(yōu)勢抗原表位肽與KLH偶聯(lián)后免疫家兔,可誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性Ig G抗體;3種免疫抗血清中的特異性Ig G抗體均可識別重組蛋白r Giardin;3個賈第蟲α-8 giardin抗原表位肽均有較好的抗原性。
【作者單位】： 甘肅省人民醫(yī)院臨床檢驗中心;首都醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 藍(lán)氏賈第鞭毛蟲 α-賈第素 生物信息學(xué)分析 抗原表位
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.31360508)~~
【分類號】：R382.2
【正文快照】： Supported by the National Natural Science Foundation of China(No.31360508)*Corresponding author,E-mail:Haifenglyh@126.comα-賈第素蛋白家族(α-giardin)是藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(簡稱賈第蟲,Giardia lamblia)細(xì)胞骨架蛋白的重要成分之一,是目前研究最多的一類細(xì)胞骨架蛋白,

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本文編號：477379