本文關(guān)鍵詞：小鼠子宮特絡(luò)細(xì)胞（Telocytes）對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞體外活化效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:Telocytes(TCs)是一種普遍存在于人類(lèi)和嚙齒類(lèi)動(dòng)物器官和組織中的特殊間質(zhì)細(xì)胞。近年來(lái)逐漸深入研究的結(jié)果顯示,TCs可能通過(guò)細(xì)胞間連接來(lái)調(diào)節(jié)局部的免疫微環(huán)境。婦科疾病,諸如子宮內(nèi)膜異位癥、不孕癥,均與免疫有密切關(guān)系,而TCs潛在的免疫調(diào)節(jié)作用,在婦科疾病中尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究體外條件下,間接共培養(yǎng)的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(p MACs)在子宮TCs的刺激下產(chǎn)生的形態(tài),活力以及分泌功能的變化,旨在了解子宮TCs在局部免疫環(huán)境調(diào)節(jié)中起到的作用以及潛在影響。方法:選取SPF級(jí)BALB/c小鼠用作TCs原代細(xì)胞培養(yǎng)和腹腔巨噬細(xì)胞的分離提取。1.過(guò)量麻醉處死小鼠,無(wú)菌條件下取小鼠子宮組織,用酶消化的方法提取TCs進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng)。2.采用亞甲藍(lán)染色,活細(xì)胞線(xiàn)粒體染色和免疫熒光染色(vimentin,CD34及c-kit)等方法鑒定并觀察TCs細(xì)胞形態(tài)。3.顯微鏡下動(dòng)態(tài)觀察并拍攝照片,記錄TCs細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)及Tps(TCs細(xì)胞特有的極細(xì)長(zhǎng)串珠狀突起)的形態(tài)變化。4.流式細(xì)胞方法標(biāo)記(vimentin及CD34)檢測(cè)培養(yǎng)TCs細(xì)胞純度。5.TCs傳代并生長(zhǎng)穩(wěn)定后,加入不含血清的基礎(chǔ)培養(yǎng)基,培養(yǎng)24 h,收集細(xì)胞上清,即Telocytes條件培養(yǎng)基(TCM)。6.無(wú)菌條件下,向小鼠腹腔內(nèi)注射巰基乙醇酸鹽,刺激腹腔巨噬細(xì)胞的產(chǎn)生。三天后用腹腔沖洗的方法提取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(pMACs)。7.用TCM培養(yǎng)pMACs作為實(shí)驗(yàn)組,空白培養(yǎng)基培養(yǎng)p MACs作為陰性對(duì)照組,空白培養(yǎng)基加脂多糖(LPS)培養(yǎng)pMACs作為陽(yáng)性對(duì)照組,建立間接共培養(yǎng)模型。8.觀察48h后巨噬細(xì)胞形態(tài),用cck-8法測(cè)定巨噬細(xì)胞活性。巨噬細(xì)胞線(xiàn)粒體熒光染色,拍照記錄并分析熒光強(qiáng)度。分別收集24h及48h培養(yǎng)細(xì)胞上清液,用elisa法檢測(cè)相關(guān)細(xì)胞因子水平(inos,il-6,tnf-α,il1-r1,il-10,tgf-β1,il-1β,il-23α及il-18)。探討pmacs受到tcs間接刺激后形態(tài),活力及分泌功能的變化。結(jié)果:1.顯微鏡下小鼠子宮tcs具有典型的形態(tài)特點(diǎn),胞體較小,但具有極為細(xì)長(zhǎng)的胞質(zhì)突起(tps),并且粗細(xì)交替。亞甲藍(lán)染色下能更清楚地觀察細(xì)胞核和tps形態(tài)。2.熒光顯微鏡下觀察,tcs呈vimentin陽(yáng)性,cd34陽(yáng)性和c-kit陰性表達(dá)。3.動(dòng)態(tài)拍攝記錄可觀察到tcs細(xì)胞胞體明顯的移動(dòng)和變化,胞體遷移過(guò)程中tps逐漸延長(zhǎng)。4.流式細(xì)胞方法檢測(cè)培養(yǎng)細(xì)胞,vimentin和cd34雙陽(yáng)性細(xì)胞占90%以上。5.tcm培養(yǎng)pmacs后,pmacs發(fā)生了明顯的形態(tài)改變,細(xì)胞伸出偽足,胞膜粗糙,胞漿內(nèi)充滿(mǎn)顆粒感,但未發(fā)生皺縮和死亡,細(xì)胞間隙被變形的細(xì)胞偽足填滿(mǎn)。而陰性對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)變化不明顯,lps刺激組細(xì)胞在lps作用下已開(kāi)始發(fā)生細(xì)胞皺縮和死亡,細(xì)胞間隙明顯增大。6.cck-8法測(cè)定細(xì)胞活性后,實(shí)驗(yàn)組較陰性對(duì)照組活性明顯升高(p0.05),相較lps刺激組無(wú)明顯差別(p0.05)。7.巨噬細(xì)胞線(xiàn)粒體熒光染色,使用熒光顯微鏡附帶軟件分析熒光強(qiáng)度。陰性對(duì)照組9732.27?1996.87;陽(yáng)性對(duì)照組:21939.16?2159.58;tcm培養(yǎng)組:29478.73?3652.01,相較于陰性對(duì)照組及陽(yáng)性對(duì)照組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。8.細(xì)胞因子定量測(cè)定:在受到tcs間接刺激的pmacs培養(yǎng)上清液中,inos和il-6在24和48小時(shí)都有顯著增高(p0.05)。tnf-α,il1-r1和il-10,雖然升高不顯著,但48小時(shí)數(shù)據(jù)仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。tgf-β1,il-1β,il-23α和il-18的數(shù)據(jù)結(jié)果在三組中無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)結(jié)論:原代培養(yǎng)的子宮tcs在間接共培養(yǎng)條件下對(duì)pmacs產(chǎn)生了明顯的活化作用,使pmacs的形態(tài)發(fā)生了明顯的改變,細(xì)胞活力有明顯的提高,分泌的部分免疫相關(guān)細(xì)胞因子也有明顯增加。推測(cè)子宮tcs在組織器官的免疫調(diào)節(jié)中可以起到激活和調(diào)節(jié)的作用,在局部的免疫微環(huán)境中扮演著重要角色。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果使利用TCs的免疫輔助功能治療婦產(chǎn)科疾病有了可能。
【關(guān)鍵詞】：小鼠 子宮 特絡(luò)細(xì)胞 Telocytes 巨噬細(xì)胞 活化 免疫調(diào)節(jié) 免疫反應(yīng) 細(xì)胞因子 酶 不育 生育障礙
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 前言11-13
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法13-19
• 結(jié)果19-28
• 討論28-33
• 總結(jié)33-34
• 參考文獻(xiàn)34-40
• 綜述40-51
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 中英文對(duì)照縮略詞表51-53
• 攻讀碩士研究生期間所獲成績(jī)53-54
• 研究生期間參與的科研基金項(xiàng)目54-55
• 致謝55-57

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1 李恕香;袁瑤;;抗孕-53及其類(lèi)似物對(duì)小鼠子宮內(nèi)膜結(jié)構(gòu)的影響[J];解剖學(xué)報(bào);1987年02期

2 徐端正,貢沁燕,楊藻宸;小鼠子宮平滑肌腎上腺素受體亞型的研究(摘要)[J];上海醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1988年03期

3 徐端正,貢沁燕,楊藻宸;小鼠子宮平滑肌腎上腺素β受體亞型的研究[J];生理學(xué)報(bào);1988年03期

4 葉希平;陳曉蓉;張榮宜;高曉妹;;胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白-4在圍植入期小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá)及意義[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年06期

5 馬華剛,朱桂金;著床期小鼠子宮內(nèi)膜促血管生成素-2的表達(dá)[J];生殖醫(yī)學(xué)雜志;2005年01期

6 徐端正,貢沁燕,楊藻宸;小鼠子宮平滑肌的腎上腺素受體性質(zhì)與性功能狀態(tài)的關(guān)系(摘要)[J];上海第一醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1985年05期

7 張麗娟;甘草提取劑對(duì)小鼠子宮內(nèi)膜癌的抑制作用[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(中醫(yī)中藥分冊(cè));1998年03期

8 尹華偉;武玉玲;;信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3在早孕小鼠子宮中的表達(dá)[J];山東醫(yī)學(xué)高等專(zhuān)科學(xué)校學(xué)報(bào);2008年05期

9 薛克勛,高巖,高進(jìn);小鼠子宮頸癌14號(hào)移植到近交系小鼠后生長(zhǎng)特性和轉(zhuǎn)移規(guī)律研究(簡(jiǎn)報(bào))[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);1987年02期

10 張榮宜;陳曉蓉;朱坤;;巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子在圍植入期小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2008年06期

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1 龐厚清;李尚為;;雌、孕激素對(duì)小鼠子宮內(nèi)膜白血病抑制因子表達(dá)的影響[A];第二屆全國(guó)不育癥研討會(huì)論文匯編[C];2007年

2 郭斌;張璐;韓玉帥;杜朋;岳占碰;;血管生成素-2在小鼠子宮中的表達(dá)與調(diào)節(jié)[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會(huì)第十六次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

3 吳云霞;黃光英;龔萍;;健胎液對(duì)小鼠子宮內(nèi)膜植入點(diǎn)β3、粘蛋白-1表達(dá)的影響[A];湖北省藥學(xué)會(huì)第十一屆會(huì)員代表大會(huì)暨2007年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2007年

4 劉曼芳;杜惠蘭;;補(bǔ)腎法對(duì)子宮內(nèi)膜容受性障礙模型小鼠子宮LPAR-3及Galection-3影響的比較研究[A];第十一次全國(guó)中醫(yī)婦科學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2011年

5 楊延周;王愛(ài)華;林鵬飛;靳亞平;宋玉潔;崔趁趁;胡林勇;李曉;陳風(fēng)雷;李倩;蘭向莉;楊磊;;LRF在圍植入期小鼠子宮中的表達(dá):參與調(diào)節(jié)胚胎植入及蛻膜化[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)——第三屆中國(guó)獸醫(yī)臨床大會(huì)論文集[C];2012年

6 岳利民;Daikoku T;Das SK;Dey SK.;;細(xì)胞周期素G1、G2與小鼠子宮著床過(guò)程的關(guān)系及卵巢激素對(duì)其表達(dá)的調(diào)控[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)2004年消化內(nèi)分泌生殖學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2004年

7 翁亞光;何俊琳;王應(yīng)雄;劉學(xué)慶;陳雪梅;;小鼠子宮內(nèi)膜LIF基因表達(dá)研究[A];新世紀(jì) 新機(jī)遇 新挑戰(zhàn)——知識(shí)創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（上冊(cè)）[C];2001年

8 楊倩;史萬(wàn)玉;鐘秀會(huì);;槲皮素對(duì)細(xì)菌脂多糖誘導(dǎo)流產(chǎn)孕小鼠子宮組織中轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1的影響[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)——第二屆中國(guó)獸醫(yī)臨床大會(huì)論文集(下冊(cè))[C];2010年

9 耿梅英;苑方重;翟向和;鐘秀會(huì);;米非司酮誘導(dǎo)流產(chǎn)改變小鼠子宮CD4+/CD8+及巨噬細(xì)胞的分布[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物解剖學(xué)及組織胚胎學(xué)分會(huì)第十七次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集（上）[C];2012年

10 陳素紅;宗紅心;朱振亞;王輝;呂秀娟;呂圭源;;消ve丸對(duì)小鼠子宮肌瘤影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];2009年中國(guó)藥學(xué)大會(huì)暨第九屆中國(guó)藥師周論文集[C];2009年

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1 王樹(shù)芳;著床后雌激素對(duì)兔妊娠及胎盤(pán)建立的作用和束縛應(yīng)激對(duì)小鼠子宮內(nèi)膜崩解的作用[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

2 白志坤;Runx在小鼠子宮內(nèi)的表達(dá)與調(diào)節(jié)[D];吉林大學(xué);2014年

3 羅文萍;GABA信號(hào)在圍植入期小鼠子宮中的表達(dá)及功能研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

4 彭洪英;AQP7在圍植入期小鼠子宮的表達(dá)及功能探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

5 郭斌;Ang-2和Ang-3在小鼠子宮及卵巢中的表達(dá)與調(diào)節(jié)[D];吉林大學(xué);2010年

6 馬琳琳;孕激素不同種類(lèi)及不同劑量對(duì)小鼠子宮內(nèi)膜形態(tài)及出血有關(guān)基因表達(dá)影響的比較研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2010年

7 胡菲菲;小鼠子宮內(nèi)膜邊緣群干/祖細(xì)胞的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

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1 崔立靖;孕激素維持下ROS抑制劑NAC對(duì)NF-κB參與的小鼠子宮內(nèi)膜崩解的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

2 郭傳輝;Foxp3在小鼠子宮中的表達(dá)與調(diào)節(jié)[D];吉林大學(xué);2016年

3 池遲;小鼠子宮特絡(luò)細(xì)胞（Telocytes）對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞體外活化效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2016年

4 劉娜;PDCD4在早孕期小鼠子宮內(nèi)膜的表達(dá)模式及其功能[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2016年

5 李惠;干預(yù)“石門(mén)”穴對(duì)著床期小鼠子宮內(nèi)膜容受性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2009年

6 楊丹;雙酚A對(duì)小鼠子宮的影響及其作用機(jī)制的研究[D];東北農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

7 李曉蘭;圍植入期小鼠子宮內(nèi)膜形態(tài)學(xué)變化及激活素A、抑制素α的表達(dá)和功能[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

8 彭影;中藥改善小鼠子宮內(nèi)膜容受性的實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2007年

9 龐厚清;雌、孕激素對(duì)小鼠子宮內(nèi)膜白血病抑制因子表達(dá)的影響[D];四川大學(xué);2005年

10 張榮宜;巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子在圍植入期小鼠子宮內(nèi)膜中的表達(dá)及其作用的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2009年

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本文編號(hào)：475280