發(fā)布時間：2017-06-20 00:08

  本文關(guān)鍵詞：人類誘導(dǎo)多能干細胞的培養(yǎng)、鑒定及其攜帶的多能性基因-Oct4、Nanog、Lin28和Fgf4表達水平的檢測，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:觀察人類誘導(dǎo)多能干細胞在體外的培養(yǎng)情況與生物學(xué)特性,并檢測其相關(guān)多能性基因的表達水平,為后期定向誘導(dǎo)人類誘導(dǎo)多能干細胞向表皮樣干細胞分化奠定實驗基礎(chǔ),也為其能夠成為組織工程種子細胞新來源提供了可能性。方法:將人類誘導(dǎo)多能干細胞接種在經(jīng)過輻照處理的CF-01小鼠的胚胎成纖維細胞(feeder細胞)上,加入人類胚胎干細胞完全培養(yǎng)基(含bFGF)培養(yǎng)細胞。將此時的人類誘導(dǎo)多能干細胞分為A1和A2兩組,A1組細胞直接進行堿性磷酸酶染色檢測,并使用TRIzon裂解液裂解細胞,提取該組細胞的總RNA,進行實時定量PCR檢測其相關(guān)多能性基因的表達水平;A2組細胞則采用Ⅳ型膠原酶消化法傳代,倒置相差顯微鏡下觀察誘導(dǎo)多能干細胞傳代后的生長情況和細胞形態(tài)。傳代至第15代時,A2組細胞同樣進行堿性磷酸酶染色檢測和實時定量PCR檢測相關(guān)多能性基因的表達水平。結(jié)果:本實驗中培養(yǎng)的人類誘導(dǎo)多能干細胞生長情況良好,表現(xiàn)出經(jīng)典的干細胞克隆樣生長,邊界清晰,增殖旺盛;A1和A2兩組細胞在堿性磷酸酶染色檢測中均呈現(xiàn)陽性表現(xiàn);A1和A2兩組細胞進行實時定量PCR檢測相關(guān)多能性基因結(jié)果顯示:A1和A2兩組中4種基因的相對表達量沒有明顯差異,無統(tǒng)計學(xué)意義(P〉0.05)。結(jié)論:本實驗中培養(yǎng)的人類誘導(dǎo)多能干細胞可以穩(wěn)定生長并旺盛增殖,在生物學(xué)特性方面也同人類胚胎干細胞相類似。隨著人類誘導(dǎo)多能干細胞傳遞代數(shù)的增加,它所表達的相關(guān)多能性基因的水平仍與最初的人類誘導(dǎo)多能干細胞的表達水平相接近,并不會因此而出現(xiàn)下調(diào)。這為后期本課題組進一步誘導(dǎo)人類誘導(dǎo)多能干細胞定向分化為表皮樣干細胞提供了實驗基礎(chǔ),也表明了人類誘導(dǎo)多能干細胞作為種子細胞新來源的潛力。
【關(guān)鍵詞】：胚胎干細胞 誘導(dǎo)多能干細胞 分化 多能性基因 實時定量PCR
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 摘要3-4
• ABSTRACT4-8
• 中英文縮略詞表8-9
• 第1章 引言9-11
• 第2章 材料和方法11-19
• 2.1 實驗材料11
• 2.1.1 組織標本11
• 2.2 主要儀器和試劑11-12
• 2.2.1 主要儀器11
• 2.2.2 主要試劑11-12
• 2.2.3 主要溶液的配置及保存12
• 2.3 實驗方法12-18
• 2.3.1 實驗分組12
• 2.3.2 飼養(yǎng)層（feeder）的制備12-13
• 2.3.3 人類誘導(dǎo)多能干細胞的培養(yǎng)13-14
• 2.3.4 人類誘導(dǎo)多能干細胞的鑒定14-15
• 2.3.5 采用Real-Time Quantitative PCR技術(shù)檢測人類誘導(dǎo)多能干細胞中多能性基因的表達水平15-18
• 2.4 統(tǒng)計分析18-19
• 第3章 結(jié)果19-24
• 3.1 細胞形態(tài)學(xué)觀察19-22
• 3.1.1 復(fù)蘇后MEF生長情況19-20
• 3.1.2 人類誘導(dǎo)多能干細胞生長情況20-22
• 3.2 堿性磷酸酶染色（AP染色）結(jié)果22-23
• 3.3 應(yīng)用Real-Time Quantitative PCR檢測兩組細胞多能性基因表達水平23-24
• 第4章 討論24-31
• 第5章 結(jié)論31-32
• 致謝32-33
• 參考文獻33-37
• 攻讀學(xué)位期間獲得的研究成果37-38
• 綜述 誘導(dǎo)多能干細胞的研究現(xiàn)狀及其面臨的問題38-48
• 參考文獻45-48

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中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張雷鳴;張劍寧;;誘導(dǎo)多能干細胞的研究[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2009年05期

2 ;我科學(xué)家將誘導(dǎo)多能干細胞轉(zhuǎn)化效率提高到10% 專家認為該研究領(lǐng)先世界跨入“高鐵時代”[J];硅谷;2010年10期

3 ;誘導(dǎo)多能干細胞機理與技術(shù)研究:躋身世界先進行列[J];廣東科技;2010年15期

4 周成效;;從文獻統(tǒng)計分析看誘導(dǎo)多能干細胞的研究[J];現(xiàn)代情報;2011年02期

5 黃甜;;誘導(dǎo)多能干細胞的免疫原性[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報;2011年03期

6 楊夢晗;化冰;池亞菲;王超;;誘導(dǎo)多能干細胞研究進展[J];生理科學(xué)進展;2012年01期

7 劉思征;馬廉;;誘導(dǎo)多能干細胞的研究進展[J];汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2013年03期

8 關(guān)波;;一種細胞“返老還童”機制被發(fā)現(xiàn)[J];老同志之友;2013年17期

9 李貴妃;任彩萍;姚開泰;;誘導(dǎo)多能干細胞研究進展[J];生命科學(xué);2009年01期

10 王弘愷;康九紅;;誘導(dǎo)多能干細胞在心血管疾病研究和治療中的應(yīng)用[J];生命科學(xué);2009年05期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 夏小雨;張偉;李錚;徐晨;;小鼠誘導(dǎo)多能干細胞向雄性生殖細胞的誘導(dǎo)分化[A];第二屆中國醫(yī)學(xué)細胞生物學(xué)學(xué)術(shù)大會暨細胞生物學(xué)教學(xué)改革會議論文集[C];2008年

2 李錚;胡洪亮;李朋;郭熙志;劉平;張偉;張玲玲;史占平;田汝輝;黃翼然;;誘導(dǎo)多能干細胞經(jīng)體內(nèi)外誘導(dǎo)向精子細胞分化研究[A];第十七屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

3 蔣春艷;董娟;廖婷婷;寧松;薛志剛;崔毓桂;劉嘉茵;范國平;曾橋;;建立人誘導(dǎo)多能干細胞系及向神經(jīng)系統(tǒng)分化研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議專刊[C];2012年

4 蔣春艷;董娟;廖婷婷;寧松;范國平;曾橋;薛志剛;崔毓桂;劉嘉茵;;建立人誘導(dǎo)多能干細胞系及向神經(jīng)系統(tǒng)分化研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國計劃生育學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2012年

5 孫玉華;趙熒暉;任曉帥;鄧怡;徐安秀;魏世成;;多肽修飾紫外交聯(lián)甲基丙烯酸化透明質(zhì)酸膜培養(yǎng)人誘導(dǎo)多能干細胞[A];第八屆全國口腔材料學(xué)術(shù)交流會暨中華口腔醫(yī)學(xué)會口腔材料專業(yè)委員會2013年會論文集[C];2013年

6 李朋;楊施;胡洪亮;田汝輝;朱勇;馬猛;黃翼然;何祖平;李錚;郭熙志;;誘導(dǎo)多能干細胞體外培養(yǎng)與重構(gòu)生精小管誘導(dǎo)精子發(fā)生機制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國生殖醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議�？痆C];2012年

7 康九紅;;miRNAs在細胞重編程中的作用和機制[A];細胞—生命的基礎(chǔ)——中國細胞生物學(xué)學(xué)會2013年全國學(xué)術(shù)大會·武漢論文摘要集[C];2013年

8 駱玉梅;孫筱放;范勇;陳欣潔;余波瀾;黎青;孔舒;鄭育紅;李少英;何文智;孫筱放;;疾病特異性誘導(dǎo)多能干細胞(iPSCs)的建立及相關(guān)研究[A];第十二次全國醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2014年

9 張偉;丁慧;夏小雨;劉平;蔡恒;李朋;黃翼然;徐晨;李錚;;誘導(dǎo)多能干細胞生精小管移植向雄性配子分化潛能研究[A];第十六屆全國泌尿外科學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

10 駱瑩;邢謙哲;高英堂;朱爭艷;王鵬;劉輝;李成龍;杜智;;Rho相關(guān)蛋白激酶抑制劑Y-27632對人誘導(dǎo)多能干細胞凍存后復(fù)蘇效率的影響[A];天津市生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)會第三十四屆學(xué)術(shù)年會論文集[C];2014年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 杞人　朝勝;我科學(xué)家將誘導(dǎo)多能干細胞轉(zhuǎn)化效率提高到10%[N];科技日報;2009年

2 記者 李天舒 通訊員 朱丹萍;體細胞“變身”誘導(dǎo)多能干細胞機制部分闡明[N];健康報;2012年

3 常麗君;美用誘導(dǎo)多能干細胞培育出軟骨[N];科技日報;2012年

4 記者 白毅;人誘導(dǎo)多能干細胞構(gòu)建再生牙齒獲成功[N];中國醫(yī)藥報;2013年

5 記者 劉霞;誘導(dǎo)多能干細胞首次獲批進行人體實驗[N];科技日報;2014年

6 記者 常麗君;用蛋白質(zhì)制造誘導(dǎo)多能干細胞更加安全高效[N];科技日報;2012年

7 記者 毛黎;利用血液細胞培養(yǎng)誘導(dǎo)多能干細胞獲成功[N];科技日報;2009年

8 記者 范建;我科學(xué)家發(fā)現(xiàn)一個基因影響誘導(dǎo)多能干細胞質(zhì)量[N];科技日報;2014年

9 記者 李天舒　通訊員 朱丹萍;尿液中也可提取誘導(dǎo)多能干細胞[N];健康報;2011年

10 記者 曹斯　實習(xí)生 李嬌 朱璐詩 通訊員 朱丹萍;維C誘導(dǎo)多能干細胞效率提百倍[N];南方日報;2014年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前7條

1 史慧君;高效制備綿羊誘導(dǎo)多能干細胞的研究[D];石河子大學(xué);2015年

2 劉日淵;經(jīng)腰椎穿刺注射干細胞內(nèi)耳移植新途徑的探索研究[D];中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院;2016年

3 林兆宇;二相法誘導(dǎo)多能干細胞及其分子通路研究[D];南京大學(xué);2012年

4 陳晨;運用人誘導(dǎo)多能干細胞建立唐氏綜合征中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變模型的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2012年

5 劉鍇;建立安全有效的豬的誘導(dǎo)多能干細胞[D];南開大學(xué);2014年

6 秦潔;誘導(dǎo)多能干細胞來源的神經(jīng)干細胞移植治療腦出血的實驗研究[D];鄭州大學(xué);2014年

7 李曉霞;基因重組蛋白誘導(dǎo)多能干細胞基礎(chǔ)研究[D];暨南大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 許士俊;小鼠誘導(dǎo)多能干細胞與PHBHHx膜體外共培養(yǎng)并制作心肌補片的實驗研究[D];首都醫(yī)科大學(xué);2015年

2 趙俐菁;誘導(dǎo)多能干細胞株的建立及過表達抗凋亡基因Bcl-2的iPSCs構(gòu)建[D];浙江大學(xué);2016年

3 徐健;人類誘導(dǎo)多能干細胞的培養(yǎng)、鑒定及其攜帶的多能性基因-Oct4、Nanog、Lin28和Fgf4表達水平的檢測[D];南昌大學(xué);2016年

4 趙霞;血管內(nèi)皮生長因子對誘導(dǎo)多能干細胞向心肌細胞分化的影響[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

5 熊挺淋;誘導(dǎo)多能干細胞與心肌細胞融合的實驗研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

6 杜融;21三體綜合征誘導(dǎo)多能干細胞系的建立及誘導(dǎo)神經(jīng)分化的研究[D];廣州醫(yī)科大學(xué);2014年

7 陳皖娟;利用TALEN技術(shù)向人誘導(dǎo)多能干細胞引入癲癇相關(guān)SCN1A基因突變[D];安徽大學(xué);2014年

8 秦禎蔚;尿液來源的體細胞誘導(dǎo)多能干細胞的建立[D];浙江大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：人類誘導(dǎo)多能干細胞的培養(yǎng)、鑒定及其攜帶的多能性基因-Oct4、Nanog、Lin28和Fgf4表達水平的檢測，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：464109