本文關(guān)鍵詞：SIRT1的選擇性剪接變異體參與大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的分化研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:神經(jīng)干細(xì)胞是分布于神經(jīng)系統(tǒng)的、具有自我更新能力和多向分化潛能的細(xì)胞,能生成多種神經(jīng)細(xì)胞。由于其免疫原性低又具有良好的遷移性能,被廣泛用于神經(jīng)損傷后再生與修復(fù)領(lǐng)域。神經(jīng)干細(xì)胞具有分化為神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的能力,但其分化受到多種因素影響,包括細(xì)胞外環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)素、細(xì)胞因子、信號(hào)通路和轉(zhuǎn)錄因子等。而在神經(jīng)損傷以及神經(jīng)退行性疾病的局部微環(huán)境中,神經(jīng)干細(xì)胞往往分化為神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,如何控制神經(jīng)干細(xì)胞在特定環(huán)境下分化為預(yù)期的終末細(xì)胞是待解決的關(guān)鍵問(wèn)題。沉默信息調(diào)節(jié)因子2相關(guān)酶1(silent information regulator 2 homolog 1,SIRT1)是一種NAD+依賴的脫乙�；�,通過(guò)對(duì)組蛋白及多種非組蛋白進(jìn)行去乙�；揎梾⑴c細(xì)胞衰老、細(xì)胞分化、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞糖脂代謝等重要的生理過(guò)程。已有研究發(fā)現(xiàn)SIRT1在神經(jīng)干細(xì)胞的分化過(guò)程中發(fā)揮一定的調(diào)控作用,但有關(guān)其調(diào)控方向的研究結(jié)果不一致。例如,研究顯示誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化后SIRT1水平顯著下降,過(guò)表達(dá)SIRT1使神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元的分化減少;但也有研究指出抑制SIRT1使神經(jīng)干細(xì)胞的分化能力顯著提高。因此,有關(guān)SIRT1與神經(jīng)干細(xì)胞分化過(guò)程的研究現(xiàn)狀是,SIRT1具有調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞分化的作用,但究竟是神經(jīng)干細(xì)胞分化的促進(jìn)因子還是抑制因子,目前尚沒(méi)有統(tǒng)一結(jié)論。選擇性剪接(Alternative Splicing,AS)是指m RNA前體(Pre-m RNA)通過(guò)選擇不同剪接位點(diǎn)的組合,剪切掉不同的內(nèi)含子或外顯子,將同一基因中的外顯子以不同的組合方式產(chǎn)生不同的成熟m RNA分子。不同的m RNA選擇性剪接異構(gòu)體可以進(jìn)一步翻譯成功能不同或互相拮抗的蛋白質(zhì),或者在相同的細(xì)胞由于表達(dá)水平的不同導(dǎo)致不同的表型。不同的選擇性剪接變異體在具體的細(xì)胞功能活動(dòng)中可能是相互獨(dú)立或共同發(fā)揮作用。近年研究顯示SIRT1存在選擇性剪接,如人的SIRT1已經(jīng)發(fā)現(xiàn)兩種選擇性剪接變異體,分別是缺失第8外顯子的SIRT1-△Exon8和缺失第2至第9外顯子的SIRT1-△Exon2/9,這兩種不同的選擇性剪接變異體各自發(fā)揮特定的功能,明顯區(qū)別于SIRT1-FL在細(xì)胞中發(fā)揮的功能。已知SIRT1廣泛分布于大鼠神經(jīng)系統(tǒng),而SIRT1的選擇性剪接變異體是否也存在于此尚不清楚;如果存在,其選擇性剪接變異體的功能是什么以及它是否參與了神經(jīng)干細(xì)胞的分化呢。我們推測(cè)大鼠神經(jīng)系統(tǒng)可能存在SIRT1的選擇性剪接變異體,也許正是之前忽略了SIRT1選擇性剪接的存在,才導(dǎo)致了SIRT1在神經(jīng)干細(xì)胞分化中矛盾結(jié)論的產(chǎn)生,即SIRT1選擇性剪接的存在可能為之前有關(guān)SIRT1作用的矛盾觀點(diǎn)提供一個(gè)合理的解釋。目前有關(guān)SIRT1選擇性剪接的研究多數(shù)集中在小鼠和人源細(xì)胞。大鼠是僅次于小鼠的最常用的實(shí)驗(yàn)哺乳動(dòng)物,已知SIRT1廣泛分布于大鼠神經(jīng)系統(tǒng),探討大鼠SIRT1是否存在選擇性剪接將為后續(xù)研究選擇性剪接變異體的生理、病理功能奠定基礎(chǔ)。SIRT1基因在哺乳動(dòng)物高度保守,而由于種屬差異,大鼠的SIRT1基因與人類并不完全相同。通過(guò)基因比對(duì),我們推測(cè)大鼠的SIRT1基因很有可能缺失第7外顯子,即產(chǎn)生SIRT1-△Exon7。因此,本研究首先觀察大鼠神經(jīng)系統(tǒng)是否存在SIRT1-△Exon7,其次比較SIRT1的全長(zhǎng)(SIRT1-FL)和SIRT1的選擇性剪接變異體(SIRT1-△Exon7)在海馬(神經(jīng)干細(xì)胞的來(lái)源部位)和皮層(成熟神經(jīng)細(xì)胞的富集部位)這兩個(gè)部位的表達(dá)差異,為SIRT1-△Exon7是否參與神經(jīng)干細(xì)胞的分化提供初步的探索;再通過(guò)比較SIRT1-FL和SIRT1-△Exon7在神經(jīng)干細(xì)胞分化前后的表達(dá)變化和酶活性差異,進(jìn)一步明確SIRT1-FL和SIRT1-△Exon7在神經(jīng)干細(xì)胞分化過(guò)程中的作用。方法:1、PCR檢測(cè)SIRT1-FL和SIRT1-△Exon7:取新生SD大鼠的大腦組織,分離海馬與皮層。提取總RNA,普通反轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)SIRT1-FL和選擇性剪接變異體SIRT1-△Exon7的表達(dá)。然后再應(yīng)用RT-PCR方法分別檢測(cè)SIRT1-FL和SIRT1-△Exon7在海馬與皮層這兩個(gè)部位的表達(dá)。2、神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)、鑒定及誘導(dǎo)分化:采用無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)法,新生大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞增殖形成懸浮的神經(jīng)球后,應(yīng)用免疫熒光技術(shù)對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞進(jìn)行鑒定,檢測(cè)其標(biāo)記性蛋白巢蛋白(Nestin)的表達(dá)。再用含有10%胎牛血清的DMEM/F-12培養(yǎng)基誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞分化,隨后分別用神經(jīng)元特異性的微管相關(guān)蛋白β-Tubulin抗體和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特異性的膠質(zhì)纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)抗體行免疫熒光染色,鑒定已經(jīng)分化的神經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞。3、RT-PCR檢測(cè)SIRT1-FL和SIRT1-△Exon7:應(yīng)用RT-PCR方法,檢測(cè)增殖的神經(jīng)球和神經(jīng)球誘導(dǎo)分化后SIRT1-FL和SIRT1-△Exon7的m RNA含量。4、SIRT1酶活性檢測(cè):用SIRT1活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)神經(jīng)球分化前后SIRT1去乙�；富钚缘淖兓�。結(jié)果:1、SIRT1-△Exon7和SIRT1-FL的m RNA在大鼠海馬和皮層均有表達(dá);2、海馬SIRT1-△Exon7的m RNA水平比SIRT1-FL低62.02%(P0.05),皮層SIRT1-△Exon7的m RNA水平比SIRT1-FL低83.33%(P0.05);皮層SIRT1-FL m RNA含量比海馬高5.81%(P0.05),而皮層SIRT1-△Exon7的含量比海馬低56.68%(P0.05);3、神經(jīng)干細(xì)胞分化前的SIRT1-△Exon7的m RNA水平比SIRT1-FL低44.12%(P0.05),分化后SIRT1-△Exon7的m RNA水平比SIRT1-FL低74.62%(P0.05);神經(jīng)干細(xì)胞分化后的SIRT1-FL m RNA含量較分化前增高30.21%,SIRT1-△Exon7的m RNA含量較分化前降低41.02%(P0.05);分化后總的SIRT1去乙�；富钚暂^分化前增高30.08%(P0.05)。結(jié)論:1、我們首次發(fā)現(xiàn)大鼠神經(jīng)系統(tǒng)存在SIRT1-△Exon7;2、SIRT1-△Exon7在海馬和皮層的表達(dá)水平都低于SIRT1-FL,皮層的SIRT1-△Exon7水平低于海馬,而皮層的SIRT1-FL水平高于海馬,間接提示SIRT1-FL可能促進(jìn)了神經(jīng)干細(xì)胞的分化過(guò)程而SIRT1-△Exon7可能發(fā)揮相反的作用;3、SIRT1-△Exon7在神經(jīng)干細(xì)胞分化前后的表達(dá)水平都低于SIRT1-FL,分化后的SIRT1-△Exon7水平低于分化前,分化后的SIRT1-FL水平高于分化前,這一結(jié)果與海馬和皮層的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致,進(jìn)一步明確SIRT1-FL可能促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞分化而SIRT1-△Exon7抑制分化。神經(jīng)干細(xì)胞分化后較分化前相比,總的SIRT1去乙�；富钚陨咚�(30.08%)與SIRT1-FL的m RNA含量的升高水平(30.21%)幾乎一致,提示SIRT1-FL可能是通過(guò)增高其去乙�；富钚远龠M(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的分化;而SIRT1-△Exon7在分化后不但水平下降,且由于其缺失第七外顯子而使酶活性也大大降低,因此SIRT1-△Exon7幾乎不可能對(duì)總的SIRT1酶活性的升高做出貢獻(xiàn),提示SIRT1-△Exon7可能作為獨(dú)立于SIRT1-FL之外的一個(gè)信號(hào)分子抑制神經(jīng)干細(xì)胞的分化。
【關(guān)鍵詞】：神經(jīng)干細(xì)胞 分化 選擇性剪接 SIRT1 SIRT1-△Exon7
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R338
【目錄】：

• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-13
• 常用縮寫(xiě)詞中英文對(duì)照表13-14
• 前言14-17
• 1 材料與方法17-28
• 1.1 主要儀器和試劑17-19
• 1.2 主要培養(yǎng)基、溶液的配制方法19-20
• 1.3 實(shí)驗(yàn)分組20
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法20-27
• 1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理27-28
• 2 結(jié)果28-37
• 2.1 檢測(cè)SIRT1-FL和SIRT1-△Exon7 的mRNA在大鼠海馬及皮層的表達(dá)28-31
• 2.2 比較SIRT1-FL和SIRT1-△Exon7 的mRNA在神經(jīng)干細(xì)胞分化前后的表達(dá)差異31-37
• 3 討論37-40
• 4 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-44
• 綜述44-50
• 參考文獻(xiàn)48-50
• 致謝50-51
• 在學(xué)期間承擔(dān)/參與的科研課題與研究成果51-52
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷52

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張敬軍,夏作理,劉焯霖;神經(jīng)干細(xì)胞的研究[J];泰山醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2002年02期

2 季慶;神經(jīng)干細(xì)胞的研究近況[J];醫(yī)學(xué)綜述;2002年05期

3 劉岳文,杜永紅,王可,徐正順;神經(jīng)干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2003年02期

4 劉佳梅,陳東,孟曉婷;一種獲得神經(jīng)干細(xì)胞單細(xì)胞的新方法[J];中國(guó)康復(fù)理論與實(shí)踐;2004年01期

5 王忠誠(chéng),于春江;神經(jīng)干細(xì)胞研究進(jìn)展[J];心腦血管病防治;2004年03期

6 楊東波,李永利,蔣傳路,楊立莊;神經(jīng)干細(xì)胞分化調(diào)控機(jī)制研究進(jìn)展[J];中華神經(jīng)外科疾病研究雜志;2004年05期

7 薛杉;張旺明;徐如祥;;神經(jīng)干細(xì)胞的遷移和網(wǎng)絡(luò)化(英文)[J];中國(guó)臨床康復(fù);2005年45期

8 張麗;顧振倫;秦正紅;;神經(jīng)干細(xì)胞分化為神經(jīng)元的基因調(diào)控(英文)[J];Neuroscience Bulletin;2006年05期

9 劉佳梅;;腦內(nèi)皮細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的遷移[J];中國(guó)組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志;2009年04期

10 張立波;邢華;許寬華;郭聯(lián)慶;惲?xí)r鋒;;神經(jīng)干細(xì)胞的研究及前景分析[J];中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志;2010年10期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 王華;王文輝;林蕾;;神經(jīng)干細(xì)胞的研究進(jìn)展及前景展望[A];第六屆西部介入放射學(xué)術(shù)會(huì)議寧夏醫(yī)學(xué)會(huì)放射學(xué)分會(huì)第四屆年會(huì)介入放射學(xué)新技術(shù)繼續(xù)教育學(xué)習(xí)班論文匯編[C];2009年

2 戴毅;韓忠朝;;神經(jīng)干細(xì)胞研究進(jìn)展及臨床前景展望[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第八屆組織學(xué)與胚胎學(xué)專業(yè)青年研討會(huì)論文集[C];2004年

3 孫一睿;胡錦;王爾松;奚才華;姚海軍;;單層黏附培養(yǎng)技術(shù)在哺乳動(dòng)物神經(jīng)干細(xì)胞體外穩(wěn)定增殖和多向分化中的應(yīng)用[A];中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)神經(jīng)外科醫(yī)師分會(huì)第四屆全國(guó)代表大會(huì)論文匯編[C];2009年

4 劉佳梅;;腦內(nèi)皮細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的遷移[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

5 魏勇;應(yīng)大君;張偉;董世武;;幼齡家豬腦SVZ神經(jīng)干細(xì)胞的分離與鑒定[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

6 司銀楚;朱培純;程龍;吳海霞;許紅;;去皮層血管對(duì)成年大鼠腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞的影響[A];解剖學(xué)雜志——中國(guó)解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

7 李學(xué)坤;郭安臣;左萍萍;;胎鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)、鑒定及亞克隆[A];中國(guó)藥理學(xué)會(huì)第十屆全國(guó)神經(jīng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨浙江省藥理學(xué)會(huì)2002年年會(huì)論文摘要集[C];2002年

8 李力;萬(wàn)琪;;小鼠神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)及缺血神經(jīng)元對(duì)其增殖、分化的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

9 李力;萬(wàn)琪;劉永紅;張巍;;小鼠神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)及缺血神經(jīng)元對(duì)其增殖、分化的影響[A];科技、工程與經(jīng)濟(jì)社會(huì)協(xié)調(diào)發(fā)展——中國(guó)科協(xié)第五屆青年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2004年

10 徐群淵;;神經(jīng)干細(xì)胞的分離、純化和永生化[A];中國(guó)組織工程、干細(xì)胞與神經(jīng)再生學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2004年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 胡德榮;“抑制蛋白”可控制神經(jīng)干細(xì)胞提前分化[N];健康報(bào);2007年

2 孫國(guó)根　白毅;靈長(zhǎng)類腦內(nèi)神經(jīng)干細(xì)胞被發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2011年

3 孫國(guó)根;阻礙卒中后神經(jīng)干細(xì)胞再生的“元兇”被發(fā)現(xiàn)[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2013年

4 ;我國(guó)科學(xué)家成功地在體外培養(yǎng)出神經(jīng)干細(xì)胞[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

5 沈麗 付鈺;神奇的神經(jīng)干細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

6 時(shí)仲省 高思敏 劉春陽(yáng);河南醫(yī)大成功培養(yǎng)人胚神經(jīng)干細(xì)胞[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2001年

7 梓華;神經(jīng)干細(xì)胞可治惡性腦癌[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

8 許琦敏;腦損傷修復(fù)治療又有新希望[N];文匯報(bào);2007年

9 北京市神經(jīng)外科研究所 北京天壇醫(yī)院 王忠誠(chéng)邋院士;神經(jīng)修復(fù)的生力軍——神經(jīng)干細(xì)胞[N];健康報(bào);2008年

10 孫國(guó)根;神經(jīng)干細(xì)胞并非“全能制造者”[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2009年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 張帆;Miranda磷酸化調(diào)控果蠅神經(jīng)干細(xì)胞不對(duì)稱分裂的機(jī)制[D];浙江大學(xué);2014年

2 張坤;極化巨噬細(xì)胞與脊髓來(lái)源神經(jīng)干細(xì)胞聯(lián)合移植對(duì)脊髓損傷治療作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

3 褚天慈;血管生成素2對(duì)胎鼠腦皮層神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化作用及其分子機(jī)制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2015年

4 胡園園;AF1q在神經(jīng)發(fā)育中的功能及調(diào)控機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

5 張鳳云;神經(jīng)干細(xì)胞中PFK-1對(duì)神經(jīng)發(fā)生的負(fù)調(diào)控作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2016年

6 郭立云;獼猴胚胎源性神經(jīng)干細(xì)胞誘導(dǎo)、腦內(nèi)移植及其在青光眼玻璃體內(nèi)的轉(zhuǎn)歸—探索性研究[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

7 任永娟;材料調(diào)控神經(jīng)干細(xì)胞的研究[D];清華大學(xué);2009年

8 曹翠麗;大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及向神經(jīng)元的誘導(dǎo)分化[D];河北醫(yī)科大學(xué);2005年

9 周虎田;骨髓源神經(jīng)干細(xì)胞生物學(xué)特性的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

10 段發(fā)亮;神經(jīng)干細(xì)胞培養(yǎng)、增殖、遷移和分化的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2005年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 魏維;松果菊苷對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞體外增殖的影響[D];福建中醫(yī)藥大學(xué);2015年

2 周強(qiáng)意;轉(zhuǎn)TrkC神經(jīng)干細(xì)胞聯(lián)合膠原支架對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷大鼠模型治療作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2015年

3 孫爽;孕酮對(duì)Aβ_(25-35)損傷的神經(jīng)干細(xì)胞增殖和分化的影響及機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

4 田士來(lái);RA與WNT信號(hào)通路聯(lián)合調(diào)節(jié)神經(jīng)元前體細(xì)胞分化的體外研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

5 劉吉星;創(chuàng)傷性腦損傷后移植神經(jīng)干細(xì)胞的研究[D];蘭州大學(xué);2016年

6 陳四化;葉酸聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞治療小鼠局灶性腦缺血損傷[D];蘭州大學(xué);2016年

7 李海太;BMP-4對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)轉(zhuǎn)歸影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

8 王紅格;RAE-1分子在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中表達(dá)的研究[D];吉林大學(xué);2016年

9 衛(wèi)美辰;SIRT1的選擇性剪接變異體參與大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的分化研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2015年

10 張賢;弓形蟲(chóng)棒狀體蛋白R(shí)OP18對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞凋亡與分化的影響及機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2016年

  本文關(guān)鍵詞：SIRT1的選擇性剪接變異體參與大鼠神經(jīng)干細(xì)胞的分化研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：457557