本文關(guān)鍵詞：Muc2基因沉默可降低益生菌抑制大腸桿菌黏附和侵襲的能力，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的建立抑制腸上皮細(xì)胞基因組中Muc2基因表達(dá)的CRISPR/Cas9系統(tǒng)并探索粘蛋白Muc2在鼠李糖乳桿菌GG株(LGG)抑制大腸桿菌K1(Escherichia coli,E.coli k1)株E44黏附和侵襲腸上皮中的作用機(jī)制。方法設(shè)計(jì)2個(gè)長(zhǎng)20~25 bp的sg RNA分別靶向Muc2,合成sg RNA寡核苷酸序列并構(gòu)建CRISPR表達(dá)載體,轉(zhuǎn)染野生型人結(jié)腸癌Ht29細(xì)胞,蛋白免疫印跡法檢測(cè)抑制效率及通過MTT法檢測(cè)其細(xì)胞活力及生長(zhǎng)情況后,競(jìng)爭(zhēng)性排斥分析驗(yàn)證粘蛋白Muc2在益生菌抑制E44黏附侵襲腸上皮中的作用。結(jié)果目的sg RNA寡核苷酸雙鏈成功插入酶切后的lenticrisprv2質(zhì)粒載體中且序列正確;穩(wěn)定抑制Muc2表達(dá)的細(xì)胞株篩選成功;Muc2基因沉默后,與空白對(duì)照組相比,其表達(dá)水平明顯降低,抑制率可達(dá)81%(P0.01);黏附侵襲實(shí)驗(yàn)中E44相對(duì)黏附率為72.23%(P0.01),相對(duì)侵襲率為81.49%(P0.01),益生菌LGG的抑制E44黏附和侵襲作用明顯下調(diào)。結(jié)論Muc2基因下調(diào)明顯降低益生菌抑制E44黏附和侵襲腸上皮細(xì)胞的能力,提示益生菌刺激Muc2表達(dá)上調(diào)可能是其強(qiáng)化加固腸粘膜屏障和拮抗致病菌功能的關(guān)鍵性機(jī)制之一,并可為腸道細(xì)菌性感染疾病的預(yù)防治療提供了一個(gè)新手段。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生與熱帶醫(yī)學(xué)學(xué)院//廣東省熱帶病研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 微生物學(xué)系;南方醫(yī)科大學(xué)P3實(shí)驗(yàn)室;南方醫(yī)科大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： Muc LGG E.coli K CRISPER/Cas Ht 侵襲
【基金】：南方醫(yī)科大學(xué)公衛(wèi)學(xué)院院長(zhǎng)基金(GW201518) 2015年度廣東省級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(201512121026)
【分類號(hào)】：R371
【正文快照】： Muc2基因是美國(guó)學(xué)者Gum等[1]于1989年自人小腸黏膜的c DNA表達(dá)文庫(kù)中克隆得到的一種粘蛋白核心肽基因,定位在染色體11p15.3~15.5上,是編譯分泌型粘蛋白Mucin2(Muc2)的主要基因。粘蛋白Muc2是構(gòu)成腸道粘液層的主要成分,正常時(shí)僅在小腸和空腸的杯狀細(xì)胞中有表達(dá)且表達(dá)量較低,可

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