本文關(guān)鍵詞：運(yùn)用重疊延伸PCR技術(shù)構(gòu)建SGK3激酶PX結(jié)構(gòu)域突變體，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:構(gòu)建SGK3激酶PX結(jié)構(gòu)域突變體載體,觀察其在人腎胚細(xì)胞293T中的表達(dá)與定位。方法:利用重疊延伸PCR原則設(shè)計(jì)引物,合成具有點(diǎn)突變的SGK3突變體,將其連接到p EGFP載體上,測序驗(yàn)證;將所獲突變載體瞬時轉(zhuǎn)染人腎胚細(xì)胞293T,利用熒光倒置顯微鏡檢驗(yàn)突變體在細(xì)胞中的表達(dá)及功能實(shí)現(xiàn)。結(jié)果:測序結(jié)果表明合成了具有點(diǎn)突變的SGK3序列;熒光倒置顯微鏡下SGK3突變體相較野生型SGK3在293T細(xì)胞內(nèi)的不均勻分布表明轉(zhuǎn)染成功,突變體載體在人腎胚細(xì)胞293T中獲得表達(dá)且有所定位。結(jié)論:通過改變PX結(jié)構(gòu)域序列上第90位氨基酸可以使SGK3激酶失去定位的功能,從而為研究SGK3在細(xì)胞中的功能提供基礎(chǔ)。
【作者單位】： 貴州醫(yī)科大學(xué);軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;
【關(guān)鍵詞】： SGK激酶 重疊延伸PCR PX結(jié)構(gòu)域
【基金】：國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(81470138,81372770,81372140)
【分類號】：Q78;R3416
【正文快照】： SGK3是屬于AGC蛋白家族的激酶。SGK家族有3個同分異構(gòu)體SGK1、SGK2和SGK3,它們與AKT家族分子的催化域擁有近55%的相同序列[1]。SGK3受轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后磷酸化修飾,在PI3K下游作為連接生長因子、胰島素、營養(yǎng)物等與細(xì)胞生長、增殖、代謝、生存的一條重要途徑[2]。近年來隨著研究的

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