發(fā)布時(shí)間：2017-06-13 09:11

  本文關(guān)鍵詞：H7N9流感病毒血凝素在昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)及抗血清的制備，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:利用昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)H7N9流感病毒血凝素(HA),以獲得的重組血凝素(rHA1)蛋白免疫家兔制備抗rHA1血清,以用于單向免疫擴(kuò)散(SRID)法檢測(cè)H7N9流感病毒裂解疫苗HA含量。方法:構(gòu)建含H7N9 HA1基因的重組桿狀病毒,轉(zhuǎn)染Sf9細(xì)胞表達(dá)rHA1蛋白。用rHA1蛋白免疫家兔獲得抗rHA1血清。通過(guò)血凝抑制(HI)法和SRID法檢測(cè)抗血清的HI效價(jià)、特異性和線性范圍。結(jié)果:rHA1蛋白在昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中成功實(shí)現(xiàn)分泌表達(dá),經(jīng)純化后純度≥90%。不同劑量的rHA1蛋白免疫家兔后獲得抗rHA1血清,HI效價(jià)分別為1 280和5 120。SRID試驗(yàn)中可與H7N9抗原國(guó)際參考品反應(yīng)并產(chǎn)生沉淀環(huán),10μg·m L~(-1)到40μg·m L~(-1)抗原濃度范圍內(nèi)沉淀環(huán)直徑與抗原濃度線性正相關(guān),R~2大于0.99,與H1N1、H3N2和B型流感病毒無(wú)交叉反應(yīng)。用該免疫血清和H7N9抗血清國(guó)際參考品分別檢測(cè)H7N9流感病毒裂解疫苗HA含量,兩者無(wú)顯著性差異。結(jié)論:在大流感發(fā)生時(shí),昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的rHA1蛋白可以用于制備SRID試驗(yàn)用免疫血清,以用于H7N9流感病毒裂解疫苗HA含量測(cè)定。
【作者單位】： 中國(guó)食品藥品檢定研究院;
【關(guān)鍵詞】： 流感疫苗有效成分檢測(cè) HN流感病毒 rHA蛋白 血凝素 免疫血清 昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng) 血凝抑制效價(jià) 單向免疫擴(kuò)散
【分類號(hào)】：R392-33
【正文快照】： 技術(shù)有限公司。His鼠單抗購(gòu)自天根生化科技(北京)有限公司,Ni2+Sepharose FF親和層析柱購(gòu)自GE公司。H7N9抗原國(guó)際參考品(編號(hào)14/250)、H7N9抗血清國(guó)際參考品(編號(hào)13/180)購(gòu)自英國(guó)國(guó)家生物制品檢定所(NIBSC)。甲型H7N9流感病毒裂解疫苗批號(hào)為SS201401001、SS201401002和SS20140

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5 記者 孫國(guó)根;H7N9病毒出現(xiàn)抗藥性變異[N];健康報(bào);2013年

  本文關(guān)鍵詞：H7N9流感病毒血凝素在昆蟲桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)及抗血清的制備，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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