臍血間充質(zhì)干細(xì)胞分化為神經(jīng)樣細(xì)胞的誘導(dǎo)因素的比較及優(yōu)化
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【摘要】:目的探討誘導(dǎo)人臍血間充質(zhì)干細(xì)胞(h UCB-MSCs)向神經(jīng)樣細(xì)胞分化的最優(yōu)條件。方法采用密度梯度離心法獲得MSCs;流式細(xì)胞術(shù)分析h UCB-MSCs CD34、CD29、CD44等免疫表型;用5種不同誘導(dǎo)因子進(jìn)行誘導(dǎo):(1)表皮生長(zhǎng)因子(EGF)+堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(b FGF);(2)維甲酸(RA)+EGF+b FGF;(3)RA+腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)+b FGF;(4)丹參素+EGF+b FGF;(5)β-巰基乙醇(β-ME)+二甲基亞砜(DMSO)+丁羥基茴香醚(BHA);并用免疫熒光法檢測(cè)誘導(dǎo)前后h UCB-MSCs神經(jīng)元核抗原(Neu N)、β-微管蛋白-Ⅲ(β-Tubulin-Ⅲ)和神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)的表達(dá)水平。結(jié)果h UCB-MSCs中CD29[(96.2±3.2)%]、CD44[(97.1±2.4)%]呈強(qiáng)陽性,CD34呈弱陽性[(4.1±2.1)%]。h UCB-MSCs經(jīng)5種方法誘導(dǎo)后均表現(xiàn)出類似神經(jīng)元樣細(xì)胞的形態(tài)改變。免疫熒光化學(xué)法結(jié)果顯示,誘導(dǎo)后的細(xì)胞高表達(dá)Neu N和β-Tubulin-Ⅲ,低表達(dá)GFAP。EGF+b FGF誘導(dǎo)組Neu N、β-Tubulin-Ⅲ陽性細(xì)胞[(42.7±3.1)%,(55.4±2.2)%]在5個(gè)誘導(dǎo)組中表達(dá)最低(P0.05);丹參素+EGF+b FGF誘導(dǎo)組(78.9±4.4%,79.6±3.3%)表達(dá)水平最高(P0.05)。結(jié)論 h UCB-MSCs經(jīng)不同誘導(dǎo)條件均能夠向神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分化,丹參素+EGF+b FGF誘導(dǎo)法誘導(dǎo)效果最好。
【作者單位】: 蘇州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院檢驗(yàn)教研室;
【關(guān)鍵詞】: 臍血間充質(zhì)干細(xì)胞 神經(jīng)樣細(xì)胞 表皮生長(zhǎng)因子 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子
【基金】:江蘇省衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)教育立項(xiàng)課題(J201302)
【分類號(hào)】:R329.2
【正文快照】: 間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)具備自我更新、增殖速度快、多向分化等特性,其在基因及細(xì)胞療法中的功能已成為目前研究的熱點(diǎn)。人臍帶血中含有MSCs,其不但能夠于體外進(jìn)行貼壁細(xì)胞的培養(yǎng),還能夠向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞以及神經(jīng)細(xì)胞等誘導(dǎo)與分化,具有多向分化潛能特
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