本文關(guān)鍵詞：CA16疫苗候選株減毒特性及生產(chǎn)工藝的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：手足口病(hand, foot and mouth disease, HFMD)是一種在全球范圍內(nèi)流行的急性傳染病,近幾年來(lái),其在亞太地區(qū)的爆發(fā)尤為嚴(yán)重。在我國(guó),手足口病已成為危害嬰幼兒健康的重要公共衛(wèi)生問(wèn)題�？滤_奇病毒A組16型(Coxsackievirus A16,CA16)和腸道病毒71型(Enterovirus71,EV71)是引起手足口病的主要病原體。一直以來(lái),研究人員把工作重點(diǎn)放在了致病率和致死率更高的EV71上,而目前越來(lái)越多的研究表明CA16的感染也是導(dǎo)致重癥及死亡病例的重要因素之一。但是目前還沒(méi)有針對(duì)CA16引起的手足口病的特效治療方案和預(yù)防手段。疫苗是控制手足口病的關(guān)鍵,本研究對(duì)CA16候選株減毒特性和生產(chǎn)工藝進(jìn)行初步的研究,旨在為其減毒疫苗的開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)將兩株CA16高免疫原性的毒株經(jīng)過(guò)連續(xù)低溫傳代減毒后,進(jìn)行減毒特性的評(píng)價(jià),結(jié)果發(fā)現(xiàn)33℃連續(xù)低溫傳代后毒株表現(xiàn)出以下特性(1)減毒候選株保持穩(wěn)定的生長(zhǎng)特性,低溫傳至第11代次后KM154株的感染性滴度波動(dòng)范圍小于0.5LgCCID50/ml;(2)減毒候選株具有良好的免疫原性,以病毒收獲液0.5ml/只的劑量腹腔注射免疫成鼠后以抗體效價(jià)大于1：4為陽(yáng)性,其抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率達(dá)100%,從抗體幾何平均滴度(Genometric Mean Titer, GMT)來(lái)看,最高可達(dá)1：30；(3)減毒候選株的致病性研究中發(fā)現(xiàn)隨著代次的升高減毒株對(duì)乳鼠的致病力減弱,KM154毒株的第12代次(KP12)后感染的乳鼠未見(jiàn)發(fā)病及死亡情況,組織中能檢測(cè)到CA16病毒,但無(wú)明顯的病理改變；(4)減毒候選株基因序列檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),與初始代次相比,毒株基本保持了遺傳的穩(wěn)定性；(5)交叉保護(hù)研究結(jié)果顯示,候選株免疫兔后制成的兔抗-CA16血清對(duì)所選的14株CA16毒株具有100%的保護(hù)作用,而15株EV71株只有一株受保護(hù)；(6)在感染了兩個(gè)減毒候選株的ICR成鼠(腹腔注射)及乳鼠(顱內(nèi)注射)的腦、脾、腎、肺、肝、心、肌肉、脊髓組織中檢測(cè)到CA16病毒,表明病毒能在乳鼠及成鼠組織內(nèi)復(fù)制并傳播。本研究還對(duì)生產(chǎn)工藝進(jìn)行了初步的探討。(1)在毒株穩(wěn)定性影響因素的研究中我們發(fā)現(xiàn),10次以內(nèi)的凍融次數(shù)對(duì)CA16毒株的感染性滴度無(wú)影響；毒株在-70℃與液氮中儲(chǔ)存8個(gè)月后,兩個(gè)條件下的毒株感染性滴度相同,均為6.58LgCCID50/ml,與原始相比,基本沒(méi)有下降；(2)加入MgCl2和我所甲肝無(wú)明膠的凍干保護(hù)劑后毒株的感染性滴度下降速率明顯減緩,加入0.5 M MgCl1組至第7天只下降了1.4LgCCID50/ml。(3)不同純化工藝的探討中我們發(fā)現(xiàn)氯仿抽提對(duì)病毒的感染性滴度及抗原含量回收率都較好,且刺激小鼠產(chǎn)生有效的抗體水平,是較理想的病毒純化方法；實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)含量及減毒株感染性滴度對(duì)毒株的免疫原性都有影響,蛋白質(zhì)含量及感染性滴度高的毒株免疫原性好。本研究獲得了具有穩(wěn)定生長(zhǎng)特性、良好免疫原性和遺傳穩(wěn)定性,且擁有對(duì)CA16廣譜保護(hù)作用的CA16減毒候選株,并對(duì)毒株熱穩(wěn)定性、純化方法等生產(chǎn)工藝進(jìn)行了初步摸索,為CA16減毒活疫苗的研發(fā)及生產(chǎn)奠定了良好的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：柯薩奇病毒A組16型 減毒株 減毒特性 生產(chǎn)工藝
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-17
• 一 手足口病及其流行概況9-11
• 二 手足口病病原學(xué)簡(jiǎn)介11
• 三 CA16病毒分子生物學(xué)特征11-13
• 四 CA16流行病學(xué)特征13
• 五 CA16疫苗及生產(chǎn)工藝研究現(xiàn)狀13-15
• 六 CA16動(dòng)物模型研究進(jìn)展15-16
• 七 本論文的研究思路、目的及意義16-17
• 實(shí)驗(yàn)材料與方法17-29
• 一 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 1 細(xì)胞17
• 2 病毒17
• 3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物17
• 4 主要試劑17-18
• 5 實(shí)驗(yàn)耗材18
• 6 實(shí)驗(yàn)儀器18-19
• 二 實(shí)驗(yàn)方法19-29
• 1 疫苗候選株減毒特性的研究19-25
• 2 生產(chǎn)工藝的初步探討25-29
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析29-44
• 一 CA16疫苗候選株減毒特性的研究29-37
• 1 CA16疫苗候選株的篩選29-30
• 2 毒株經(jīng)低溫連續(xù)傳代后生長(zhǎng)特性的評(píng)價(jià)30
• 3 毒株33℃連續(xù)傳代后溫度特征分析30
• 4 毒株33℃連續(xù)傳代后免疫原性及成鼠動(dòng)物模型的評(píng)價(jià)30-32
• 5 毒株33℃連續(xù)傳代后致病性的研究32-35
• 6 毒株遺傳穩(wěn)定性的檢測(cè)35
• 7 減毒株交叉保護(hù)效果的評(píng)價(jià)35-37
• 二 生產(chǎn)工藝的初步探討37-44
• 1 毒株穩(wěn)定性影響因素及評(píng)價(jià)37-39
• 2 不同純化工藝的初步評(píng)價(jià)39-44
• 討論44-49
• 全文小結(jié)49-50
• 參考文獻(xiàn)50-54
• 附錄 主要縮略詞54-55
• 致謝55-56
• 研究生簡(jiǎn)歷56-58

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：CA16疫苗候選株減毒特性及生產(chǎn)工藝的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：433985