本文關(guān)鍵詞：放射治療聯(lián)合常山酮誘導(dǎo)小鼠移植瘤模型旁觀者效應(yīng)及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討常山酮聯(lián)合放射治療對小鼠移植瘤旁觀者效應(yīng)及免疫微環(huán)境的影響,并探索其可能的分子機(jī)制。方法:將60只健康雌性C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為2群,一群30只用于小鼠免疫微環(huán)境的檢測,另一群30只用于旁觀者效應(yīng)的觀察。將Lewis肺癌細(xì)胞分別接種于兩群小鼠右后肢皮下,第一群小鼠于接種后7天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。第二群小鼠于右后肢皮下接種2天后,再次于左后肢皮下接種同樣數(shù)量的Lewis肺癌細(xì)胞。將兩群小鼠每組再隨機(jī)分為空白對照組(NC)、常山酮組(HF)、放療組(RT)、放療聯(lián)合常山酮組(RT+HF)及放療聯(lián)合TGF-β抑制劑組(RT+SB)�？瞻讓φ战M不放療,不給藥;常山酮組于接種后第7天至第15天予常山酮腹腔注射給藥,每只鼠2ug/0.1ml/d;放療組在接種后第8天、9天給予右腿移植瘤10Gy×2次照射;放療聯(lián)合常山酮組給藥及放射處理同常山酮組及放療組;放療聯(lián)合TGF-β抑制劑組處理同放療聯(lián)合常山酮組,但將常山酮換成SB431542,每只鼠0.1ml/d。放射治療后第7天,收獲小鼠腫瘤組織及脾臟組織,將腫瘤組織及脾臟組織研磨制備單細(xì)胞懸液后,用PMA、Ionomycin及Golgi Plug蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑刺激3-5小時后,經(jīng)表面染色、破膜固定及核內(nèi)染色后,上機(jī)行FACS檢測腫瘤組織及脾臟組織中CD8+T細(xì)胞含量并計(jì)算激活比。放射治療后第10天,收獲小鼠腫瘤組織及脾臟組織,將腫瘤組織及脾臟組織研磨制備單細(xì)胞懸液后,經(jīng)表面染色,上機(jī)行FACS檢測腫瘤組織及脾臟組織中CD11b+Gr-1+MDSC細(xì)胞含量。另一群雙腿種瘤的小鼠,自成瘤之日起,仔細(xì)觸及腫瘤結(jié)節(jié)生長情況,每隔3日測量并記錄左腿、右腿皮下移植瘤的長、短徑,再用公式演算確定移植瘤體積。發(fā)現(xiàn)小鼠死亡,應(yīng)同時計(jì)算存活時間。結(jié)果:流式結(jié)果顯示:本研究中空白對照組、常山酮組及放療組小鼠腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞中MDSC含量無明顯差異,放療聯(lián)合常山酮組及放療聯(lián)合TGF-β抑制劑組小鼠腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞中MDSC含量無明顯差異,但均有趨勢低于放療組�？瞻讓φ战M、常山酮組及放療組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞MDSC含量無明顯差異,放療聯(lián)合常山酮組及放療聯(lián)合TGF-β抑制劑組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞MDSC含量無明顯差異(P=0.711),但均有趨勢低于放療組,且放療聯(lián)合常山酮組較放療組達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.039)。小鼠腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞中各組總細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞及激活的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的數(shù)量及比例均無明顯差異。在小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中,常山酮組及放療組小鼠總細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞含量均高于空白對照組,而放療聯(lián)合常山酮組及放療聯(lián)合TGF-β抑制劑組小鼠總細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞含量均高于常山酮組及放療組。旁觀者效應(yīng)發(fā)現(xiàn),對于右腿受到照射的移植瘤,放射治療前各組小鼠腫瘤體積無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.331)。放射治療結(jié)束后第4天,放療組、放療聯(lián)合常山酮組及放療聯(lián)合TGF-β抑制劑組腫瘤體積開始小于空白對照組(P值分別=0.016、0.007、0.000)及常山酮組(P分別=0.027、0.002、0.001),放療組、放療聯(lián)合常山酮組及放療聯(lián)合TGF-β抑制劑組組腫瘤體積無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值均0.05)。放射治療結(jié)束后第10天,放療聯(lián)合常山酮組腫瘤體積開始小于放療組(P=0.046)。放射治療結(jié)束后第14天,放療聯(lián)合TGF-β抑制劑組腫瘤體積開始小于放療組(P=0.017)。治療過程中各時間點(diǎn)放療聯(lián)合常山酮組及放療聯(lián)合TGF-β抑制劑組腫瘤體積均無明顯差異(P值均0.05)。對于左腿未經(jīng)照射的移植瘤,放射治療前各組小鼠腫瘤體積無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.957)。放射治療后第7天,放射治療聯(lián)合常山酮組小鼠腫瘤體積較單純常山酮組有明顯減小(P=0.04)。放射治療后第10天,放射治療聯(lián)合常山酮組小鼠腫瘤體積較空白對照組及單純放射治療組有明顯減小(P分別=0.031、0.038)。治療結(jié)束后,放射治療聯(lián)合常山酮組6只小鼠中有2只左腿未受照射的腫瘤完全消退。直至觀察終止時,放療聯(lián)合常山酮組仍有2只小鼠存活。結(jié)論:放射治療聯(lián)合常山酮能夠增強(qiáng)Lewis肺癌移植瘤模型治療療效,并產(chǎn)生旁觀者效應(yīng),其主要的機(jī)制可能是由于常山酮抑制放射治療所激活的TGF-β傳導(dǎo)通路,并進(jìn)一步作用于機(jī)體免疫微環(huán)境。
【關(guān)鍵詞】：常山酮 放射治療 轉(zhuǎn)化生長因子-β 細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞 髓源性免疫抑制細(xì)胞 免疫微環(huán)境
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.5;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 縮略語/符號說明10-12
• 前言12-16
• 研究現(xiàn)狀、成果12-15
• 研究目的、方法15-16
• 對象和方法16-25
• 1.1 材料與儀器16-17
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞與動物16
• 1.1.2 試劑16-17
• 1.1.3 耗材17
• 1.1.4 儀器設(shè)備17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-25
• 1.2.1 試劑的配制17-18
• 1.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)18-20
• 1.2.3 動物的飼養(yǎng)管理20
• 1.2.4 移植瘤模型的建立20-21
• 1.2.5 小鼠腹腔注射技術(shù)及藥物毒性觀察21
• 1.2.6 小鼠分組及治療法21-22
• 1.2.7 小鼠腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞及脾臟淋巴細(xì)胞中MDSC細(xì)胞含量測定22-23
• 1.2.8 小鼠腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞及脾臟淋巴細(xì)胞中CD8+T細(xì)胞含量測定23-24
• 1.2.9 旁觀者效應(yīng)的觀察24
• 1.2.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法24-25
• 結(jié)果25-30
• 2.1 常山酮藥物觀察結(jié)果25
• 2.2 各組小鼠腫瘤及脾臟淋巴細(xì)胞中MDSC細(xì)胞含量25-26
• 2.3 各組小鼠腫瘤及脾臟淋巴細(xì)胞中CD8+T細(xì)胞含量26-27
• 2.4 旁觀者效應(yīng)中各組小鼠左右腿腫瘤生長抑制情況27-29
• 2.5 各組小鼠生存情況29-30
• 討論30-36
• 3.1 放射治療聯(lián)合常山酮對小鼠移植瘤及生存期的影響31-32
• 3.2 放射治療聯(lián)合常山酮對TGF-β 信號通路的影響32-33
• 3.3 放射治療聯(lián)合常山酮對免疫微環(huán)境的影響33-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻(xiàn)37-47
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明47-48
• 綜述48-67
• 綜述參考文獻(xiàn)56-67
• 致謝67-68
• 個人簡歷68

  本文關(guān)鍵詞：放射治療聯(lián)合常山酮誘導(dǎo)小鼠移植瘤模型旁觀者效應(yīng)及機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：427907