本文關(guān)鍵詞：CORMs對(duì)X射線輻照后斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:采用斑馬魚(yú)動(dòng)物模型研究一氧化碳釋放分子(CORM-3)對(duì)X射線輻照后斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的作用,并初步探討CORM-3的作用機(jī)制。材料和方法:用不同濃度的CORM-3溶液(0、6.25、12.5、25、50、100、200、400μmol/L)處理受精后4h(4hpf)的發(fā)育正常的斑馬魚(yú)胚胎并培養(yǎng)至144hpf,分別在不同的時(shí)間點(diǎn)觀察并記錄CORM-3對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的死亡率、孵化率、畸形、胎動(dòng)、心率、體長(zhǎng)及其游泳行為等發(fā)育的影響。用10μmol/L的CORM-3預(yù)處理發(fā)育正常的4hpf胚胎1h后給予4GyX射線照射,觀察CORM-3對(duì)X射線輻照后斑馬魚(yú)的死亡率、孵化率、畸形率、胎動(dòng)及游泳行為等發(fā)育的影響;采用DCFH-DA熒光探針、SOD試劑盒分別檢測(cè)24hpf胚胎體內(nèi)的活性氧水平及SOD活性;采用吖啶橙(AO)染色,流式細(xì)胞分析(FCM)檢測(cè)24hpf斑馬魚(yú)胚胎體內(nèi)凋亡細(xì)胞;采用實(shí)時(shí)熒光定量分析(RT-PCR)檢測(cè)斑馬魚(yú)胚胎凋亡相關(guān)基因表達(dá)以及蛋白免疫印跡(WB)檢測(cè)斑馬魚(yú)胚胎體內(nèi)蛋白表達(dá)水平。結(jié)果:(1)CORM-3對(duì)斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的影響:隨著CORM-3濃度的增加,斑馬魚(yú)胚胎的死亡率逐漸增加,胎動(dòng)、心率、體長(zhǎng)逐漸降低;濃度為50μmol/L的CORM-3處理組開(kāi)始可明顯抑制胚胎孵化,致使胚胎孵化率降低(P0.05);CORM-3濃度高于100μmol/L可導(dǎo)致斑馬魚(yú)幼魚(yú)形態(tài)畸形,主要為心包水腫及卵黃囊水腫。在可見(jiàn)光實(shí)驗(yàn)中,CORM-3處理組的幼魚(yú)游泳總距離隨著濃度的增加逐漸降低,200和400μmol/L處理組幼魚(yú)運(yùn)動(dòng)遲緩(P0.05)。(2)CORM-3對(duì)X射線輻照后斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的影響:X射線輻照可導(dǎo)致斑馬魚(yú)胚胎的死亡率及畸形率的增加,孵化率、胎動(dòng)及游泳總距離降低(P0.05);CORM-3預(yù)處理可降低X射線對(duì)斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的影響,表現(xiàn)為死亡率及畸形率低于X射線輻照組,孵化率、胎動(dòng)及游泳總距離高于X射線輻照組(P0.05)。(3)CORM-3對(duì)X射線輻照后的斑馬魚(yú)胚胎體內(nèi)活性氧水平以及SOD活性的影響:24 hpf時(shí),X射線輻照組斑馬魚(yú)胚胎體內(nèi)活性氧水平明顯升高,SOD活性顯著降低(P0.001);CORM-3預(yù)處理進(jìn)升高SOD活性,降低ROS水平(P0.001),緩解X射線誘導(dǎo)產(chǎn)生的斑馬魚(yú)胚胎體內(nèi)活性氧的蓄積。(4)CORM-3對(duì)X射線照射后的斑馬魚(yú)胚胎凋亡、凋亡相關(guān)基因以及蛋白水平的影響:AO染色及流式細(xì)胞分析顯示X射線輻照組斑馬魚(yú)胚胎的早期凋亡細(xì)胞較對(duì)照組多,CORM-3預(yù)處理可降低X射線引起的細(xì)胞凋亡;RT-PCR顯示X射線輻照組的促凋亡基因Bax、Caspase9、Caspase3的表達(dá)量高于對(duì)照組(P0.05),抗凋亡基因Bcl2的表達(dá)量低于對(duì)照組;CORM-3預(yù)處理可改善X射線對(duì)胚胎損傷導(dǎo)致的凋亡相關(guān)基因的表達(dá),下調(diào)Bax、Caspase9、Caspase3的表達(dá),上調(diào)抗凋亡相關(guān)基因Bcl2的表達(dá);Western blot結(jié)果顯示CORM-3預(yù)處理可緩解X射線對(duì)斑馬魚(yú)胚胎導(dǎo)致的DNA損傷,γ-H2AX,P53蛋白表達(dá)量下降,Bcl2表達(dá)量升高。結(jié)論:1)CORM-3≥50μmol/L時(shí)對(duì)斑馬魚(yú)發(fā)育具有毒性作用;10μmol/L的CORM-3對(duì)X射線輻照后的斑馬魚(yú)的發(fā)育具有潛在的保護(hù)作用。2)10μmol/L的CORM-3促進(jìn)SOD活性水平升高,降低胚胎體內(nèi)的活性氧水平,通過(guò)抗氧化應(yīng)激反應(yīng)來(lái)保護(hù)X射線對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的輻射損傷。3)10μmol/L的CORM-3通過(guò)調(diào)節(jié)凋亡相關(guān)基因的表達(dá)發(fā)揮抗凋亡作用以及促進(jìn)DNA損傷的修復(fù)來(lái)保護(hù)X射線對(duì)斑馬魚(yú)胚胎的輻射損傷。
【關(guān)鍵詞】：一氧化碳釋放分子 斑馬魚(yú)胚胎 發(fā)育毒性 X射線
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R-332;R818
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• ABSTRACT5-8
• 縮略詞表8-11
• 第一章 緒論11-17
• 1.1 一氧化碳釋放分子（CORMS）的研究現(xiàn)狀11-14
• 1.1.1 CORMs的起源11
• 1.1.2 CORMs的性質(zhì)11-13
• 1.1.3 CORMs的生物相容性研究現(xiàn)狀13-14
• 1.2 斑馬魚(yú)在藥物篩選中的應(yīng)用現(xiàn)狀14
• 1.3 斑馬魚(yú)在輻射生物學(xué)中的應(yīng)用現(xiàn)狀14-15
• 1.4 選題依據(jù)15-17
• 第二章 CORM-3 對(duì)斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的影響17-25
• 2.1 引言17
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料與方法17-18
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法18-19
• 2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-22
• 2.5 討論22-25
• 第三章 CORM-3 對(duì)X射線輻照后斑馬魚(yú)胚胎發(fā)育的作用25-30
• 3.1 引言25
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料25-26
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法26
• 3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果26-28
• 3.5 討論28-30
• 第四章 CORM-3 對(duì)X射線輻照后斑馬魚(yú)體內(nèi)ROS的影響30-35
• 4.1 引言30
• 4.2 實(shí)驗(yàn)材料30-31
• 4.3 實(shí)驗(yàn)方法31
• 4.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-33
• 4.5 討論33-35
• 第五章 CORM-3 對(duì)X射線輻照后斑馬魚(yú)胚胎凋亡的影響35-43
• 5.1 引言35
• 5.2 實(shí)驗(yàn)材料35-36
• 5.3 實(shí)驗(yàn)方法36-39
• 5.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-41
• 5.5 討論41-43
• 第六章 全文總結(jié)43-44
• 參考文獻(xiàn)44-50
• 在學(xué)期間的研究成果50-51
• 致謝51

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本文編號(hào)：407489