本文關(guān)鍵詞：陰道毛滴蟲RRas基因序列的cDNA一步克隆、表達(dá)及鑒定，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的一步克隆、表達(dá)及鑒定陰道毛滴蟲RRas基因,以了解其在組織細(xì)胞定位和功能。方法用PCR方法從陰道毛滴蟲cDNA文庫中擴(kuò)增RRas片段,用一步克隆法構(gòu)建RRas-PQE-80L載體,進(jìn)行菌落PCR和酶切鑒定,陽性克隆提取質(zhì)粒,經(jīng)測序鑒定后轉(zhuǎn)化至大腸埃希菌(E.coli)BL21,經(jīng)異丙硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)。表達(dá)產(chǎn)物用NiAgarose His純化試劑盒純化,純化產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定和Western blot分析。結(jié)果從陰道毛滴蟲cDNA表達(dá)文庫中擴(kuò)增的RRas基因片段長617bp,酶切及DNA測序證實(shí)RRas-PQE-80L重組質(zhì)粒構(gòu)建正確。表達(dá)的融合蛋白分子質(zhì)量單位約為23.6ku,該蛋白能被抗His標(biāo)簽抗體識別。結(jié)論成功構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒RRas-PQE-80L載體,并能在E.coli BL21中表達(dá),表達(dá)蛋白具有反應(yīng)原性。
【作者單位】： 鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院人體寄生蟲學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 陰道毛滴蟲 RRas基因 一步克隆 原核表達(dá) Western blot
【分類號】：R382.2
【正文快照】： *?Ras基因作為一種從腫瘤細(xì)胞中分離的轉(zhuǎn)化基因,表達(dá)的RAS蛋白具有小GTP酶的活性,調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長、增殖和分化。RAS相關(guān)GTP酶具有傳達(dá)細(xì)胞外信號至效應(yīng)細(xì)胞的功能,具有激活與失活兩種活性狀態(tài),前者與GTP結(jié)合,后者與GDP結(jié)合,是GT-Pase的開關(guān)蛋白。RAS信號通路RAF/MEK/ERKh和PI3

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本文編號：405295