本文關(guān)鍵詞：SUN5特異性抗體的制備及其應(yīng)用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的制備可檢測(cè)全長(zhǎng)SUN5的特異性抗體,并用該抗體檢測(cè)SUN5蛋白在人類生殖細(xì)胞中的表達(dá)。方法通過生物信息學(xué)比較SUN5與新剪切體SUN5β之間的差異,在差異區(qū)域設(shè)計(jì)合成短肽,制備SUN5多克隆抗體并純化。用新制備的SUN5抗體對(duì)Ntera-2細(xì)胞中的SUN5蛋白進(jìn)行Western blotting和免疫熒光檢測(cè),驗(yàn)證抗體的特異性;最后,用該抗體對(duì)人睪丸細(xì)胞涂片進(jìn)行檢測(cè),觀察SUN5蛋白在人生殖細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果成功合成了SUN5短肽,而且用該短肽制備了SUN5多克隆抗體。Western blot結(jié)果顯示,新制備的SUN5特異性抗體可檢測(cè)到全長(zhǎng)SUN5蛋白。免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在Ntera-2細(xì)胞中SUN5蛋白定位在核膜和胞漿。通過對(duì)人睪丸細(xì)胞涂片的檢測(cè)發(fā)現(xiàn),SUN5在睪丸精母細(xì)胞、圓形精子細(xì)胞及精子中均有表達(dá)。結(jié)論成功制備了SUN5特異性抗體,該特異性抗體的制備對(duì)于深入研究SUN5的功能具有重要的意義。此外,發(fā)現(xiàn)SUN5蛋白在精母細(xì)胞、圓形精子細(xì)胞及精子中均有表達(dá),提示SUN5蛋白可能在精子發(fā)生中發(fā)揮著重要的生理功能。
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心;中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【關(guān)鍵詞】： SUN 抗體 Western blot 免疫熒光 生殖細(xì)胞
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81170615)~~
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： SUN蛋白是一類含有SUN結(jié)構(gòu)域蛋白的總稱,目前發(fā)現(xiàn)的SUN蛋白有:SUN1、SUN2、SUN3、SUN4(又稱SPAG4)和SUN5(又稱SPAG4L或TSARG4)[1]。通過對(duì)廣譜性表達(dá)的SUN1和SUN2的研究發(fā)現(xiàn),SUN蛋白可通過其SUN domain與帶有KASH domain的蛋白相互作用(如:Nesprin-2,Nesprin-3等),形成復(fù)合物,

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本文編號(hào)：404327