目的： 間充質(zhì)干細(xì)胞具有多向分化潛能，體外培養(yǎng)可以分化出多種組織細(xì)胞。組織工程化軟骨構(gòu)建需要干細(xì)胞來(lái)源的軟骨樣細(xì)胞，但長(zhǎng)期培養(yǎng)會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞“去分化”問(wèn)題，這也成為制約構(gòu)建組織工程化軟骨發(fā)展的瓶頸。研究表明Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)調(diào)控干細(xì)胞的增殖、分化與凋亡。本課題目的是通過(guò)研究細(xì)胞分化過(guò)程中內(nèi)在特性的改變及Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞（humanadipose-derived stem cells, hADSCs）成軟骨的調(diào)控作用及機(jī)理，探討細(xì)胞去分化的可能原因及機(jī)制，為解決目前干細(xì)胞成軟骨分化的“失穩(wěn)”及構(gòu)建理想組織工程化軟骨修復(fù)軟骨缺損提供可靠的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和方法。 方法： 1、采用膠原酶I消化及貼壁培養(yǎng)法，從人皮下脂肪組織塊中提取間充質(zhì)干細(xì)胞。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記物及測(cè)定細(xì)胞周期；通過(guò)化學(xué)誘導(dǎo)法定向誘導(dǎo)細(xì)胞成脂、成骨、成軟骨分化，分別予以油紅O染色、堿性磷酸酶染色、鈣結(jié)節(jié)染色、堿性磷酸酶濃度測(cè)定和甲苯胺藍(lán)染色進(jìn)行鑒定。 2、采用經(jīng)典法誘導(dǎo)hADSCs成軟骨分化，分化的0～21天各時(shí)間點(diǎn)采用RealtimeRT-PCR檢...

【文章頁(yè)數(shù)】：144 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
    1. 傳統(tǒng)的關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)方法
        1.1 調(diào)動(dòng)軟骨細(xì)胞內(nèi)在愈合潛能促進(jìn)軟骨愈合
        1.2 促進(jìn)軟骨細(xì)胞的再生與修復(fù)
    2. 組織工程化軟骨在關(guān)節(jié)軟骨修復(fù)中的應(yīng)用
        2.1 自體軟骨細(xì)胞
        2.2 胚胎干細(xì)胞（embryonic stem cells, ESCs）
        2.3 間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)
    3. 組織工程化軟骨修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨存在的問(wèn)題
    4. 原子力顯微鏡(Atomic force microscopy, AFM)在細(xì)胞研究中的應(yīng)用
    5. Wnt/β-catenin 信號(hào)通路在干細(xì)胞分化中作用的研究
第一章 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定
    1. 材料與方法
    2. 結(jié)果
    3. 附圖
    4. 討論
    5. 結(jié)論
第二章 體外誘導(dǎo)人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的實(shí)驗(yàn)研究
    1. 材料與方法
    2. 結(jié)果
    3. 附圖
    4. 討論
    5. 結(jié)論
第三章 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化的可視化研究
    1. 材料與方法
    2. 結(jié)果
    3. 附圖
    4. 討論
    5. 小結(jié)
第四章 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路在人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨分化過(guò)程中的作用及機(jī)理研究
    第一節(jié) Wnt/β-catenin 信號(hào)通路在 hADSCs 成軟骨分化過(guò)程中的調(diào)控作用
        1.材料與方法
        2. 結(jié)果
        3. 附圖
        4. 討論
        5. 小結(jié)
    第二節(jié) 抑制 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路對(duì) hADSCs 成軟骨分化作用的探討
        1. 材料與方法
        2. 結(jié)果
        3 附圖
        4. 討論
        5. 小結(jié)
    第三節(jié) 全程激活 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路對(duì) hADSCs 成軟骨分化作用的探討
        1. 材料與方法
        2. 結(jié)果
        3 附圖
        4 討論
        5. 小結(jié)
    第四節(jié) 后期激活 Wnt/β-catenin 信號(hào)通路對(duì) hADSCs 成軟骨分化作用的探討
        1. 材料與方法
        2. 結(jié)果
        3. 附圖
        4. 討論
        5. 小結(jié)
全文總結(jié)
問(wèn)題與展望
參考文獻(xiàn)
英文縮略詞
攻讀博士學(xué)位期間參加科研工作情況
致謝



本文編號(hào)：4039223