腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是小RNA病毒科腸道病毒屬的成員,基因組為單股正鏈RNA,主要感染5歲以內(nèi)的嬰幼兒。多數(shù)EV71感染表現(xiàn)為手足口部的皰疹、皮疹和發(fā)熱等癥狀,部分患兒會出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥,甚至?xí)䦟?dǎo)致死亡。目前對于EV71的致病機(jī)制尚不明確,但以往研究表明病毒基因組的多個(gè)區(qū)域均與病毒復(fù)制能力和毒力相關(guān),本課題組之前研究表明EV71的非結(jié)構(gòu)蛋白2A能夠影響病毒的復(fù)制能力和毒力,但其關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)的精確定位還需進(jìn)一步研究。本研究通過比較不同毒力表型的EV71毒株中非結(jié)構(gòu)蛋白2A的差異,利用反向遺傳學(xué)技術(shù)構(gòu)建并拯救突變型毒株,研究2A蛋白的關(guān)鍵氨基酸在EV71致病機(jī)制中的作用,為疫苗和藥物的研發(fā)提供理論基礎(chǔ)。目的1.比較兩株EV71不同毒力表型株2A片段的氨基酸序列差異,將強(qiáng)毒株2A蛋白的關(guān)鍵氨基酸突變成弱毒株相應(yīng)位置的氨基酸,構(gòu)建并拯救突變型毒株。2.比較突變后的病毒與親本毒株在復(fù)制能力、致細(xì)胞損傷能力和自噬等方面的差異,探究2A蛋白上的毒力候選位點(diǎn)在EV71致病機(jī)制中的作用。方法1.利用重疊融合PCR技術(shù)得到突變后的目的片段,將目的片段酶切置換到含有EV...

【文章頁數(shù)】：74 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要 ABSTRACT 符號說明 前言 一、手足口病的流行病學(xué)特征 二、EV71的基因組結(jié)構(gòu) 三、腸道病毒71型的致病機(jī)制 實(shí)驗(yàn)材料與方法 一、實(shí)驗(yàn)材料 二、實(shí)驗(yàn)儀器 三、實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 一、突變型毒株全長cDNA的構(gòu)建 二、突變型毒株的拯救 三、突變型毒株的鑒定 四、突變型毒株的毒力檢測 討論 結(jié)論 創(chuàng)新與不足之處 附錄、附圖 參考文獻(xiàn) 致謝 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文 學(xué)位論文評閱及答辯情況表



本文編號：4035215