目的:分析和確認(rèn)轉(zhuǎn)錄因子DLX1在骨形態(tài)發(fā)生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細胞C3H10T1/2成骨分化中的作用。方法:首先,BMP9腺病毒感染C3H10T1/2細胞,RT-PCR和Western blot檢測DLX1表達變化;隨后,利用重組腺病毒技術(shù)分別過表達DLX1和RNA干擾(RNA Intenference,RNAi)抑制DLX1的表達,并利用堿性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)染色、鈣鹽沉積實驗(茜素紅染色),免疫細胞化學(xué)檢測骨鈣素(osteocalcin,OCN)表達和裸鼠皮下異位成骨實驗分析DLX1對于BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細胞成骨分化的影響。熒光素酶報告基因?qū)嶒灪蚖estern blot分析DLX1對于BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細胞Smad1/5/8信號途徑的影響。結(jié)果:BMP9可以促進C3H10T1/2細胞中DLX1基因和蛋白表達水平;過表達DLX1在體外可進一步促進BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細胞的ALP活性、鈣鹽沉積以及OCN的表達,過表達DLX1亦可促進BM...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)
        1.2.2 細胞總RNA的提取和RT-PCR
        1.2.3 ALP活性測定
        1.2.4 鈣鹽沉積實驗
        1.2.5 Western blot
        1.2.6 免疫細胞化學(xué)
        1.2.7 熒光素酶報告基因?qū)嶒?br>        1.2.8 動物實驗和組織化學(xué)染色
        1.2.9 統(tǒng)計分析
2 結(jié)果
    2.1 BMP9促進C3H10T1/2細胞中DLX1的表達
    2.2 過表達DLX1可促進BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細胞成骨分化
    2.3 RNAi抑制DLX1可減弱BMP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細胞成骨分化
    2.4 DLX1可影響B(tài)MP9誘導(dǎo)的C3H10T1/2細胞在裸鼠皮下異位成骨
    2.5 DLX1可影響B(tài)MP9誘導(dǎo)的Smad1/5/8信號的活化
3 討論



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