[目的]本實驗室在之前骨髓間充質干細胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植治療阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD)大鼠模型中發(fā)現,BMSCs可以改善AD大鼠的學習記憶能力,并且在治療后的大鼠海馬組織中發(fā)現了 血小板衍生生長因子-BB(Platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)表達顯著升高。本研究將通過體外細胞實驗進一步闡明PDGF-BB在BMSCs治療AD中的作用機制。[方法]首先以HIV慢病毒為載體構建APP695過表達的慢病毒重組體對人神經母細胞瘤細胞株(SH-SY5Y)進行轉染,然后用嘌呤霉素篩選穩(wěn)轉細胞株,構建AD的體外細胞模型即APP695過表達的SH-SY5Y細胞(后簡稱SH-SY5Y-APP695)。BMSCs與SH-SY5Y-APP695通過細胞培養(yǎng)小室進行非接觸式共培養(yǎng)72h后,通過倒置相差顯微鏡觀察共培養(yǎng)后SH-SY5Y-APP695的形態(tài)變化,并通過免疫熒光染色檢測神經細胞的標志物TuJ1的表達情況。采用ELISA檢測SH-SY5Y-APP695中A β...

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ＢＭＳＣｓ的細胞形態(tài)及免疫熒光鑒定??圖注：（Ａ）Ｐ３代ＢＭＳＣｓ?ｌ－３ｄ的細胞形態(tài)

１．?ＢＭＳＣｓ的形態(tài)及免疫熒光鑒定??ＢＭＳＣｓ接種到培養(yǎng)瓶后，細胞呈圓形，大小不一，２４ｈ后開始貼壁，細胞呈??圓形，梭形或多角形（圖２Ａ）。??為了鑒定ＢＭＳＣｓ的純度，用免疫熒光染色對ＢＭＳＣｓ的細胞表面標志物進行檢??測，結果顯示ＣＤ４５陽性率為２．?０％，ＣＤ３４陽性....

圖４?ＡＰＰ６９５?ＯＲＦ質粒結構及ＨＩＶ－ＡＰＰ６９５載體構建??圖注：（Ａ）?ＯＲＦＡＰＰ６９５質粒的結構，載體是ｐ－Ｒｅｃｅｉｖｅｒ－Ｍ９８

圖５?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ－ＨＩＶ－ＡＰＰ６９５穩(wěn)轉細胞株細胞活力檢測??圖注：（Ａ）?ｓｈａｍ、ＮＣ和ＡＰＰ過表達組細胞ｌ－３ｄ的細胞明場圖片

轉染ＨＩＶ－ＧＦＰ和ＨＩＶ－ＡＰＰ６９５?ＯＲＦ后用２?Ｕ?ｇ／ｍｌ的嘌呤霉素進行篩選，后正??常傳代培養(yǎng)。活細胞顯微鏡觀察ｓｈａｍ，?ＮＣ?（轉染ＨＩＶ），ＡＰＰ６９５?（轉染ＨＩＶ－ＡＰＰ６９５??ＯＲＦ）（圖５Ａ），并用ＭＴＴ檢測三組細胞的細胞活力，ＭＴＴ結果顯示ｓｈａｍ組....

圖６?ＡＰＰ６９５過表達對ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細胞形態(tài)和Ａ?ｅ?１－４２表達的影響??圖注：（Ａ）?ｓｈａｍ、ＮＣ及ＡＰＰ三組細胞的ＴＵｊｌ表達情況，藍色為ＤＡＰＩ染色，綠色??ＧＦＰ熒光色，紅色Ｔｕｌ細；（Ｂ－Ｃ）?ｓｈａｍ、ＮＣＡＰＰ三組細的ＡＰＰ??

本文編號：4028618