[目的]本實(shí)驗(yàn)室在之前骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)移植治療阿爾茨海默病(Alzheimer disease,AD)大鼠模型中發(fā)現(xiàn),BMSCs可以改善AD大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力,并且在治療后的大鼠海馬組織中發(fā)現(xiàn)了 血小板衍生生長(zhǎng)因子-BB(Platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB)表達(dá)顯著升高。本研究將通過體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步闡明PDGF-BB在BMSCs治療AD中的作用機(jī)制。[方法]首先以HIV慢病毒為載體構(gòu)建APP695過表達(dá)的慢病毒重組體對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株(SH-SY5Y)進(jìn)行轉(zhuǎn)染,然后用嘌呤霉素篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株,構(gòu)建AD的體外細(xì)胞模型即APP695過表達(dá)的SH-SY5Y細(xì)胞(后簡(jiǎn)稱SH-SY5Y-APP695)。BMSCs與SH-SY5Y-APP695通過細(xì)胞培養(yǎng)小室進(jìn)行非接觸式共培養(yǎng)72h后,通過倒置相差顯微鏡觀察共培養(yǎng)后SH-SY5Y-APP695的形態(tài)變化,并通過免疫熒光染色檢測(cè)神經(jīng)細(xì)胞的標(biāo)志物TuJ1的表達(dá)情況。采用ELISA檢測(cè)SH-SY5Y-APP695中A β...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖２?ＢＭＳＣｓ的細(xì)胞形態(tài)及免疫熒光鑒定??圖注：（Ａ）Ｐ３代ＢＭＳＣｓ?ｌ－３ｄ的細(xì)胞形態(tài)

１．?ＢＭＳＣｓ的形態(tài)及免疫熒光鑒定??ＢＭＳＣｓ接種到培養(yǎng)瓶后，細(xì)胞呈圓形，大小不一，２４ｈ后開始貼壁，細(xì)胞呈??圓形，梭形或多角形（圖２Ａ）。??為了鑒定ＢＭＳＣｓ的純度，用免疫熒光染色對(duì)ＢＭＳＣｓ的細(xì)胞表面標(biāo)志物進(jìn)行檢??測(cè)，結(jié)果顯示ＣＤ４５陽性率為２．?０％，ＣＤ３４陽性....

圖４?ＡＰＰ６９５?ＯＲＦ質(zhì)粒結(jié)構(gòu)及ＨＩＶ－ＡＰＰ６９５載體構(gòu)建??圖注：（Ａ）?ＯＲＦＡＰＰ６９５質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)，載體是ｐ－Ｒｅｃｅｉｖｅｒ－Ｍ９８

圖５?ＳＨ－ＳＹ５Ｙ－ＨＩＶ－ＡＰＰ６９５穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株細(xì)胞活力檢測(cè)??圖注：（Ａ）?ｓｈａｍ、ＮＣ和ＡＰＰ過表達(dá)組細(xì)胞ｌ－３ｄ的細(xì)胞明場(chǎng)圖片

轉(zhuǎn)染ＨＩＶ－ＧＦＰ和ＨＩＶ－ＡＰＰ６９５?ＯＲＦ后用２?Ｕ?ｇ／ｍｌ的嘌呤霉素進(jìn)行篩選，后正??常傳代培養(yǎng)。活細(xì)胞顯微鏡觀察ｓｈａｍ，?ＮＣ?（轉(zhuǎn)染ＨＩＶ），ＡＰＰ６９５?（轉(zhuǎn)染ＨＩＶ－ＡＰＰ６９５??ＯＲＦ）（圖５Ａ），并用ＭＴＴ檢測(cè)三組細(xì)胞的細(xì)胞活力，ＭＴＴ結(jié)果顯示ｓｈａｍ組....

圖６?ＡＰＰ６９５過表達(dá)對(duì)ＳＨ－ＳＹ５Ｙ細(xì)胞形態(tài)和Ａ?ｅ?１－４２表達(dá)的影響??圖注：（Ａ）?ｓｈａｍ、ＮＣ及ＡＰＰ三組細(xì)胞的ＴＵｊｌ表達(dá)情況，藍(lán)色為ＤＡＰＩ染色，綠色??ＧＦＰ熒光色，紅色Ｔｕｌ細(xì)；（Ｂ－Ｃ）?ｓｈａｍ、ＮＣＡＰＰ三組細(xì)的ＡＰＰ??

本文編號(hào)：4028618