發(fā)布時間：2025-01-17 14:38

　　 目的建立基于中和表位的GⅡ. 4型重組諾如病毒(Norovirus,NoV)VP1蛋白病毒樣顆粒(virus-like particle,VLP)抗原含量檢測方法,并進行驗證,以用于重組NoV疫苗質(zhì)量控制。方法應(yīng)用ELISA和HBGA-VLP阻斷試驗篩選中和性單克隆抗體,并篩選配對抗體,分別作為包被抗體和檢測抗體,建立GⅡ. 4型重組NoV VP1蛋白VLP雙抗夾心ELISA抗原定量檢測方法。確定方法的線性檢測范圍,并對方法的專屬性、準(zhǔn)確性和精密性進行驗證。結(jié)果27株GⅡ. 4 VLP特異性ELISA檢測陽性的雜交瘤細胞克隆中,有12株GⅡ. 4型阻斷抗體檢測呈陽性,選擇具有GⅡ. 4型阻斷活性的特異性單抗2H7-C5和2E6-B3作為雙抗夾心抗體對,用于建立GⅡ. 4型重組NoV VP1蛋白VLP雙抗夾心ELISA抗原定量檢測方法。該方法的線性測定范圍為15. 63～250 ng/mL,標(biāo)準(zhǔn)曲線R2均> 0. 98;準(zhǔn)確性驗證的加標(biāo)回收率在72. 23%～134. 03%之間;重復(fù)性驗證的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)為7. 06...

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 病毒及細胞
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 中和性單抗的篩選
        1.3.1 VLP特異性ELISA
        1.3.2 HBGA-VLP阻斷試驗
    1.4 中和性單抗配對抗體的篩選
    1.5 檢測方法的建立
    1.6 線性及測定范圍的確定
    1.7 方法的驗證
        1.7.1 專屬性
        1.7.2 準(zhǔn)確性
        1.7.3 精密性
            1.7.3. 1 重復(fù)性
            1.7.3. 2 中間精密性
2 結(jié)果
    2.1 中和性單抗的篩選
    2.2 中和性單抗配對抗體的篩選
    2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性及測定范圍
    2.4 方法的驗證
        2.4.1 專屬性
        2.4.2 準(zhǔn)確性
        2.4.3 精密性
            2.4.3. 1 重復(fù)性
            2.4.3. 2 中間精密性
3 討論



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