天堂国产午夜亚洲专区-少妇人妻综合久久蜜臀-国产成人户外露出视频在线-国产91传媒一区二区三区

慢病毒轉(zhuǎn)染熒光蛋白EYFP-H148Q/I152L細(xì)胞模型的構(gòu)建

發(fā)布時(shí)間:2024-12-26 05:04
   目的構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)EYFP熒光蛋白的HeLa細(xì)胞作為陰離子(鹵素)通道阻斷劑篩選的細(xì)胞模型,為高通量篩選陰離子(鹵素)通道阻斷劑提供條件。方法通過基因重組技術(shù)構(gòu)建表達(dá)YFP突變蛋白(EYFP-H148Q/I152L)和puromycin抗性的慢病毒載體。將慢病毒載體和包裝質(zhì);旌衔镛D(zhuǎn)染包裝細(xì)胞293T細(xì)胞產(chǎn)生慢病毒顆粒,感染HeLa細(xì)胞,進(jìn)一步利用抗性基因?qū)?xì)胞進(jìn)行puromycin篩選,純化細(xì)胞并擴(kuò)增至所需細(xì)胞量。采用實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot方法檢測目的基因EYFP-H148Q/I152L的表達(dá)效率。并驗(yàn)證EYFP-HeLa穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系作為鹵族離子通道阻斷劑篩選模型的活性。結(jié)果基因測序驗(yàn)證了目的基因成功插入慢病毒載體。RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果顯示,目的基因在HeLa細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)了過表達(dá)。熒光顯微鏡下觀察到EYFP-HeLa穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株能夠表達(dá)特有的EYFP黃色熒光,效率接近100%。碘離子(I-)(低滲)溶液刺激細(xì)胞陰離子(鹵素)通道的開放,內(nèi)流的I-能夠使黃色熒光淬滅。結(jié)論構(gòu)建的EYFP-HeLa細(xì)胞系能夠穩(wěn)定表達(dá)EYFP黃色熒光蛋白,對(duì)內(nèi)流入細(xì)胞的I...

【文章頁數(shù)】:6 頁

【文章目錄】:
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 目的片段的擴(kuò)增
    1.3 重組慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定
    1.4 病毒包裝與滴度測定
    1.5 病毒載體感染和穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的構(gòu)建
        1.5.1 病毒感染
        1.5.2 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的構(gòu)建
        1.5.3 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的RT-PCR檢測
        1.5.4 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的Western blot檢測
    1.6 EYFP-HeLa穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系作為鹵族離子通道阻斷劑篩選模型的活性驗(yàn)證
    1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
    2.2 病毒滴度測定
    2.3 穩(wěn)轉(zhuǎn)HeLa細(xì)胞株的建立及RT-PCR和Western blot檢測結(jié)果
        2.3.1 穩(wěn)轉(zhuǎn)HeLa細(xì)胞系中EYFP熒光效率
        2.3.2穩(wěn)轉(zhuǎn)HeLa細(xì)胞系的RT-PCR和Westernblot檢測結(jié)果
    2.4 EYFP-HeLa穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系作為鹵族離子通道阻斷劑篩選模型的活性驗(yàn)證
3 討論



本文編號(hào):4020574

資料下載
論文發(fā)表

本文鏈接:http://sikaile.net/xiyixuelunwen/4020574.html


Copyright(c)文論論文網(wǎng)All Rights Reserved | 網(wǎng)站地圖 |

版權(quán)申明:資料由用戶752e7***提供,本站僅收錄摘要或目錄,作者需要?jiǎng)h除請(qǐng)E-mail郵箱bigeng88@qq.com
大屁股肥臀熟女一区二区视频| 国产日产欧美精品大秀| 国产精品免费无遮挡不卡视频| 九九热精彩视频在线免费| 永久福利盒子日韩日韩| 国产一区二区精品高清免费| 亚洲第一区欧美日韩在线| 熟女少妇一区二区三区蜜桃| 国产精品一区二区高潮| 一区二区三区日本高清| 人妻人妻人人妻人人澡| 国产成人精品一区二区三区| 伊人国产精选免费观看在线视频| 欧美一级日韩中文字幕| 日韩无套内射免费精品| 欧美激情一区二区亚洲专区| 国产欧美日本在线播放| 后入美臀少妇一区二区| 少妇在线一区二区三区| 成人午夜视频精品一区| 91亚洲国产成人久久| 日本99精品在线观看| 在线中文字幕亚洲欧美一区 | 一区二区三区人妻在线| 午夜精品黄片在线播放| 国内欲色一区二区三区| 欧美一级黄片免费视频| 欧美一区二区不卡专区| 欧美一区二区三区喷汁尤物| 亚洲欧美日韩在线中文字幕| 日本丁香婷婷欧美激情| 日韩免费国产91在线| 风韵人妻丰满熟妇老熟女av| 麻豆视频传媒入口在线看| 国产日韩欧美专区一区| 久久偷拍视频免费观看| 成年午夜在线免费视频| 亚洲丁香婷婷久久一区| 国产亚洲欧美日韩精品一区| 欧美乱码精品一区二区三| 五月天丁香婷婷狠狠爱|