大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞條件培養(yǎng)基通過ERK1/2促進肌腱細胞增殖
發(fā)布時間:2024-12-11 06:12
間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是一類非造血干細胞,不僅來源廣泛而且具有一定的可塑性以及可以誘導(dǎo)分化為不同類型的細胞,如成骨細胞和基質(zhì)細胞等。MSCs通過分化參與組織損傷修復(fù)的能力使其成為臨床上最具應(yīng)用前景的干細胞類型之一。近年來隨著研究的深入,人們發(fā)現(xiàn),MSCs不僅可以通過定向分化替代受損組織,而且還可以通過旁分泌作用參與損傷修復(fù)。肌腱損傷是臨床常見的疾病之一;诟杉毎募‰鞊p傷修復(fù)研究表明,多種因素可以誘導(dǎo)干細胞向肌腱細胞定向分化,包括細胞因子、力學(xué)拉伸、共培養(yǎng)環(huán)境等。但是,雖然有報道表明MSCs旁分泌可促進多種組織的損傷修復(fù),但MSCs旁分泌作用是否參與肌腱損傷修復(fù)目前還未有報道。本文的主要研究目的是探究大鼠骨髓MSCs條件培養(yǎng)基(conditioned medium from rat bone marrow derived mesenchymal stem cells,r MSCs-CM)對大鼠肌腱細胞增殖的影響以及信號分子ERK1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2,ERK1/2)在...
【文章頁數(shù)】:54 頁
【學(xué)位級別】:碩士
【文章目錄】:
中文摘要
英文摘要
1 緒論
1.1 研究背景
1.1.1 肌腱損傷病理學(xué)以及治療手段的限制
1.1.2 骨髓間充質(zhì)干細胞的生物學(xué)特性
1.1.3 MSCs旁分泌的提出
1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
1.2.1 MSCs旁分泌因子影響細胞生物學(xué)行為的研究
1.2.2 MSCs參與肌腱損傷修復(fù)的研究
1.3 研究內(nèi)容
1.3.1 課題研究的主要內(nèi)容
1.3.2 研究目標
1.4 實驗設(shè)計
1.5 研究方法
1.5.1 研究方法
1.6 本課題的特色和創(chuàng)新之處
2 rMSCs和肌腱細胞的原代培養(yǎng)及鑒定
2.1 引言
2.2 實驗器材與試劑
2.2.1 實驗儀器、材料、設(shè)備
2.2.2 實驗試劑
2.2.3 主要試劑配制
2.3 實驗方法和步驟
2.3.1 r MSCs的原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)
2.3.2 檢測r MSCs原代細胞表面抗原
2.3.3 肌腱細胞的原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)
2.4 實驗結(jié)果
2.4.1 r MSCs的形態(tài)觀察
2.4.2 r MSCs表面抗原鑒定
2.4.3 肌腱細胞的形態(tài)觀察
2.5 討論
2.6 本章小結(jié)
3 rMSC-CM促進肌腱細胞增殖及其分子機理
3.1 引言
3.2 實驗器材與試劑、設(shè)備
3.2.1 實驗儀器與材料
3.2.2 實驗試劑
3.2.3 主要試劑配制
3.3 實驗方法與步驟
3.3.1 r MSCs-CM的收集
3.3.2 細胞計數(shù)法檢測r MSCs-CM對肌腱細胞的增殖
3.3.3 流式細胞術(shù)檢測肌腱細胞的細胞周期
3.3.4 Western blot技術(shù)檢測肌腱細胞中ERK1/2 激活情況
3.4 實驗結(jié)果
3.4.1 r MSCs-CM對肌腱細胞增殖的影響
3.4.2 r MSC-CM對肌腱細胞的細胞周期影響
3.4.3 r MSC-CM激活ERK1/2 信號蛋白
3.4.4 PD98059 對r MSCs-CM激活ERK1/2 的抑制情況
3.4.5 PD98059 對r MSCs-CM促肌腱細胞增殖的影響
3.4.6 PD98059 對肌腱細胞的細胞周期影響
3.5 討論
3.6 本章小結(jié)
4 結(jié)果與展望
4.1 主要結(jié)論
4.2 后續(xù)研究工作的展望
致謝
參考文獻
附錄:A. 作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文目錄
本文編號:4016313
【文章頁數(shù)】:54 頁
【學(xué)位級別】:碩士
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英文摘要
1 緒論
1.1 研究背景
1.1.1 肌腱損傷病理學(xué)以及治療手段的限制
1.1.2 骨髓間充質(zhì)干細胞的生物學(xué)特性
1.1.3 MSCs旁分泌的提出
1.2 國內(nèi)外研究現(xiàn)狀
1.2.1 MSCs旁分泌因子影響細胞生物學(xué)行為的研究
1.2.2 MSCs參與肌腱損傷修復(fù)的研究
1.3 研究內(nèi)容
1.3.1 課題研究的主要內(nèi)容
1.3.2 研究目標
1.4 實驗設(shè)計
1.5 研究方法
1.5.1 研究方法
1.6 本課題的特色和創(chuàng)新之處
2 rMSCs和肌腱細胞的原代培養(yǎng)及鑒定
2.1 引言
2.2 實驗器材與試劑
2.2.1 實驗儀器、材料、設(shè)備
2.2.2 實驗試劑
2.2.3 主要試劑配制
2.3 實驗方法和步驟
2.3.1 r MSCs的原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)
2.3.2 檢測r MSCs原代細胞表面抗原
2.3.3 肌腱細胞的原代培養(yǎng)及傳代培養(yǎng)
2.4 實驗結(jié)果
2.4.1 r MSCs的形態(tài)觀察
2.4.2 r MSCs表面抗原鑒定
2.4.3 肌腱細胞的形態(tài)觀察
2.5 討論
2.6 本章小結(jié)
3 rMSC-CM促進肌腱細胞增殖及其分子機理
3.1 引言
3.2 實驗器材與試劑、設(shè)備
3.2.1 實驗儀器與材料
3.2.2 實驗試劑
3.2.3 主要試劑配制
3.3 實驗方法與步驟
3.3.1 r MSCs-CM的收集
3.3.2 細胞計數(shù)法檢測r MSCs-CM對肌腱細胞的增殖
3.3.3 流式細胞術(shù)檢測肌腱細胞的細胞周期
3.3.4 Western blot技術(shù)檢測肌腱細胞中ERK1/2 激活情況
3.4 實驗結(jié)果
3.4.1 r MSCs-CM對肌腱細胞增殖的影響
3.4.2 r MSC-CM對肌腱細胞的細胞周期影響
3.4.3 r MSC-CM激活ERK1/2 信號蛋白
3.4.4 PD98059 對r MSCs-CM激活ERK1/2 的抑制情況
3.4.5 PD98059 對r MSCs-CM促肌腱細胞增殖的影響
3.4.6 PD98059 對肌腱細胞的細胞周期影響
3.5 討論
3.6 本章小結(jié)
4 結(jié)果與展望
4.1 主要結(jié)論
4.2 后續(xù)研究工作的展望
致謝
參考文獻
附錄:A. 作者在攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的論文目錄
本文編號:4016313
本文鏈接:http://sikaile.net/xiyixuelunwen/4016313.html
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