本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的NGF基因沉默對(duì)PC12細(xì)胞分化的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的探討慢病毒介導(dǎo)的神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor,NGF)基因沉默后對(duì)大鼠腎上腺嗜鉻瘤細(xì)胞(pheochromocytoma cell,PC12)分化的影響及其機(jī)制。方法構(gòu)建NGF shRNA慢病毒載體。培養(yǎng)PC12細(xì)胞,隨機(jī)分為5組(n=3):1正常對(duì)照組(NC):PC12細(xì)胞置于DMEM/HG細(xì)胞培養(yǎng)液和促感染試劑polybrene中培養(yǎng);2空病毒感染組(LV CON):PC12細(xì)胞置于空病毒和polybrene中培養(yǎng);3慢病毒NGF shRNA1感染組(LV sh NGF1):PC12細(xì)胞置于慢病毒NGF shRNA1和polybrene中培養(yǎng);4慢病毒NGF shRNA2感染組(LV sh NGF2):PC12細(xì)胞置于慢病毒NGF shRNA2和polybrene中培養(yǎng);5慢病毒NGF shRNA3感染組(LV sh NGF3):PC12細(xì)胞置于慢病毒NGF shRN3和polybrene中培養(yǎng)。處理結(jié)束后,熒光顯微鏡下檢測(cè)感染效率、熒光定量RT-PCR法檢測(cè)細(xì)胞NGF mRNA表達(dá)水平、Western blot法檢測(cè)慢病毒感染后細(xì)胞NGF、細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase,ERK1/2)和磷酸化-ERK1/2(phosphorylated ERK1/2,p-ERK1/2)蛋白表達(dá),細(xì)胞增殖檢驗(yàn)試劑(cell counting kit-8,CCK-8)檢測(cè)細(xì)胞活性,顯微鏡下觀察PC12細(xì)胞形態(tài),統(tǒng)計(jì)細(xì)胞突起長(zhǎng)度和最大細(xì)胞直徑。結(jié)果慢病毒感染PC12細(xì)胞的效率超過(guò)90%。與NC組相比,LV sh NGF3組NGF mRNA表達(dá)降低(P0.05),NGF蛋白水平明顯降低(P0.05),ERK1/2蛋白表達(dá)和細(xì)胞活性無(wú)差異,p-ERK1/2蛋白表達(dá)有明顯下降(P0.01),細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化,細(xì)胞突起長(zhǎng)度和最大細(xì)胞直徑均變小(P0.01),細(xì)胞分化被抑制。結(jié)論慢病毒介導(dǎo)的NGF基因沉默通過(guò)抑制ERK1/2活化,影響PC12細(xì)胞分化。
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院麻醉科;
【關(guān)鍵詞】： 慢病毒 NGF 基因沉默 PC細(xì)胞 分化 ERK/
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 81471145)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 神經(jīng)生長(zhǎng)因子(nerve growth factor,NGF)是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族中重要一員,其在感覺(jué)神經(jīng)和交感神經(jīng)的生長(zhǎng)發(fā)育中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[1]。大鼠腎上腺嗜鉻瘤細(xì)胞(pheochromocytoma cell,PC12)是大鼠腎上腺嗜鉻瘤細(xì)胞株,由于其可在NGF誘導(dǎo)下向交感神經(jīng)元樣細(xì)胞分化,目前廣泛用于神

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1 饒春明;袁力勇;丁有學(xué);劉蘭;李響;郭瑩;裴德寧;;小鼠NGF基因治療型DNA質(zhì)粒的構(gòu)建及中試工藝的優(yōu)化[J];中國(guó)生物制品學(xué)雜志;2008年03期

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1 朱武飛;人β-NGF基因在大腸桿菌中的克隆、表達(dá)及其鑒定[D];吉林大學(xué);2008年

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本文編號(hào)：401177