目的探討miR-592在小鼠胚胎干細(xì)胞(mouse embryonic stem cells,m ESCs)自我更新及分化過程中的作用。方法通過轉(zhuǎn)染試劑將miR-592表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入m ESCs,以過表達(dá)miR-592。利用qRT-PCR及Western印跡法分析miR-592對m ESCs分化的影響。利用Target Scan數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR-592作用的靶基因,并通過雙熒光素酶報告實驗驗證靶基因。利用Western印跡法探究miR-592及其靶基因?qū) ESCs自我更新的影響。結(jié)果 qRT-PCR及Western印跡法實驗結(jié)果表明miR-592促進(jìn)mESCs向外胚層方向分化。生物信息學(xué)分析及雙熒光素酶報告實驗的結(jié)果表明Cep135是miR-592作用的靶基因,而Western印跡法實驗發(fā)現(xiàn)Cep135能夠促進(jìn)m ESCs的自我更新。結(jié)論 miR-592通過靶向下調(diào)Cep135的表達(dá),以抑制m ESCs的自我更新,進(jìn)而促使m ESCs向外胚層方向分化。

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圖1小鼠胚胎干細(xì)胞免疫細(xì)胞化學(xué)染色(×100)Fig．1Immunocytochemicalstainingofmouseembryonicstemcells(×100)

1．7統(tǒng)計學(xué)處理所有實驗數(shù)據(jù)均以x±s表示，針對不同的實驗對照組，使用單因素方差進(jìn)行分析比較。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2．1小鼠胚胎干細(xì)胞全能性的鑒定將mESCs和KO-miＲ-592mESCs進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色，以鑒定其全能性，結(jié)果顯示兩組細(xì)胞中全能性相關(guān)基因N....

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