本文關(guān)鍵詞：Optiprep連續(xù)密度梯度離心方法的建立，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:試驗(yàn)不同條件,優(yōu)化Optiprep密度梯度離心方法,建立最佳的Optiprep連續(xù)密度梯度,為純化病毒提供良好的參數(shù)。方法:試驗(yàn)不同的旋轉(zhuǎn)角度、重復(fù)次數(shù)、離心時(shí)間,以及用不同濃度的Optiprep制備連續(xù)密度梯度等條件,摸索制備連續(xù)密度梯度的最佳方案,將此最佳方案應(yīng)用于純化丙肝病毒(HCV),并通過q RT-PCR驗(yàn)證純化效果。結(jié)果:通過各種條件的摸索,確立了制備連續(xù)密度梯度的最佳方案,即制備10%~40%Optiprep連續(xù)密度梯度,在旋轉(zhuǎn)角度為85°時(shí),1號(hào)程序設(shè)置為30 r/min離心5 s,2號(hào)程序設(shè)置為0 r/min 15 s,重復(fù)1~2程序10次。將此程序用于純化HCV,得到了較好的純化效果。結(jié)論:建立了制備Optiprep連續(xù)密度梯度離心的方法,為進(jìn)一步提高病毒的純化效果提供了參數(shù)。
【作者單位】： 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院&北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所;云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： Optiprep密度梯度離心 碘克沙醇 旋轉(zhuǎn)角度 純化
【基金】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院“協(xié)和青年基金”項(xiàng)目(3332015148)
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 病毒的純化一直是病毒學(xué)研究的一個(gè)難點(diǎn),密度梯度離心法是病毒純化最常使用的一種方法[1-3]。密度梯度區(qū)帶離心法(簡(jiǎn)稱區(qū)帶離心法),是將樣品加在惰性梯度介質(zhì)中進(jìn)行離心沉降或沉降平衡,在一定的離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上,形成不同區(qū)帶的分離方法。以往采用較

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