[目的]為了選擇一種理想的實驗動物來作為T細胞免疫治療模型,本文在初步分析人類、食蟹猴和豬CD3蛋白同源性的基礎上,建立利用人源性CD3抗體誘導食蟹猴外周血T淋巴細胞的體外分離培養(yǎng)技術,并利用CRISPR/Cas9基因編輯技術敲除食蟹猴T細胞PD-1基因,探討PD-1基因敲除對T細胞的影響,以期建立利用CRISPR/Cas9靶向T細胞PD-1進行腫瘤細胞免疫治療的策略,進而為T細胞免疫治療方面的研究和應用提供實驗依據(jù)。[方法]從NCBI查詢獲取人類、食蟹猴和豬CD3蛋白各自的氨基酸序列,并用DNAMAN軟件進行序列比對、同源性分析和構建系統(tǒng)進化樹。Western blotting檢測三種T細胞膜上CD3蛋白的表達水平。分離健康食蟹猴PBMC,分為3組,A組加入人源性CD3抗體單刺激、B組加入人重組IL-2單刺激、C組加入人源性CD3抗體和人重組IL-2共刺激。倒置顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)并計數(shù),繪制細胞生長曲線,臺盼藍染色檢測細胞活性,流式細胞術檢測T細胞表面標志物CD3、CD4、CD8的表達。CRISPR/Cas9介導的食蟹猴T細胞PD-1基因的敲除:(1)質粒構建:利用gRNA在線...

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 人源性CD3抗體誘導食蟹猴T淋巴細胞培養(yǎng)方法的建立
    材料與方法
    結果
    討論
    本部分結論
第二部分 CRISPR/Cas9介導的PD-1基因敲除對食蟹猴T細胞的影響
    材料與方法
    結果
    討論
    本部分結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間獲得的學術成果
致謝



本文編號：3976581