[目的]為了選擇一種理想的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)作為T細(xì)胞免疫治療模型,本文在初步分析人類、食蟹猴和豬CD3蛋白同源性的基礎(chǔ)上,建立利用人源性CD3抗體誘導(dǎo)食蟹猴外周血T淋巴細(xì)胞的體外分離培養(yǎng)技術(shù),并利用CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)敲除食蟹猴T細(xì)胞PD-1基因,探討PD-1基因敲除對(duì)T細(xì)胞的影響,以期建立利用CRISPR/Cas9靶向T細(xì)胞PD-1進(jìn)行腫瘤細(xì)胞免疫治療的策略,進(jìn)而為T細(xì)胞免疫治療方面的研究和應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。[方法]從NCBI查詢獲取人類、食蟹猴和豬CD3蛋白各自的氨基酸序列,并用DNAMAN軟件進(jìn)行序列比對(duì)、同源性分析和構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹。Western blotting檢測(cè)三種T細(xì)胞膜上CD3蛋白的表達(dá)水平。分離健康食蟹猴PBMC,分為3組,A組加入人源性CD3抗體單刺激、B組加入人重組IL-2單刺激、C組加入人源性CD3抗體和人重組IL-2共刺激。倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)并計(jì)數(shù),繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線,臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞活性,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T細(xì)胞表面標(biāo)志物CD3、CD4、CD8的表達(dá)。CRISPR/Cas9介導(dǎo)的食蟹猴T細(xì)胞PD-1基因的敲除:(1)質(zhì)粒構(gòu)建:利用gRNA在線...

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞表
中文摘要
英文摘要
前言
第一部分 人源性CD3抗體誘導(dǎo)食蟹猴T淋巴細(xì)胞培養(yǎng)方法的建立
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    本部分結(jié)論
第二部分 CRISPR/Cas9介導(dǎo)的PD-1基因敲除對(duì)食蟹猴T細(xì)胞的影響
    材料與方法
    結(jié)果
    討論
    本部分結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間獲得的學(xué)術(shù)成果
致謝



本文編號(hào)：3976581