發(fā)布時(shí)間：2024-04-20 10:16

　　自2012年起,一種新型冠狀病毒——中東呼吸綜合征冠狀病毒(Middle East Respiratory Syndrome coronavirus, MERS-CoV)持續(xù)在中東地區(qū)蔓延,已造成上百例感染病例,致死率高達(dá)50%。這是繼2003年爆發(fā)的嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome coronavirus, SARS-CoV)、2004年發(fā)現(xiàn)的人類(lèi)冠狀病毒NL63(Human Coronavirus NL63,HCoV-NL63)以及2006年發(fā)現(xiàn)的人類(lèi)冠狀病毒HKU1(Human Coronavirus HKU1, HCoV-HKU1)之后發(fā)現(xiàn)的又一個(gè)人類(lèi)冠狀病毒家族的新成員,這表明冠狀病毒對(duì)人類(lèi)健康的威脅始終存在,然而到目前為止,在世界范圍內(nèi)還沒(méi)有切實(shí)有效的能用于臨床治療MERS-CoV、SARS-CoV等冠狀病毒感染的疫苗或特效藥物。 冠狀病毒作為單股正鏈RNA病毒,編碼約16個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(non-structural proteins, nsps)介導(dǎo)自身的轉(zhuǎn)錄復(fù)制過(guò)程。這其中,nsp5(即主蛋白酶)參與將冠狀...

【文章頁(yè)數(shù)】：134 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
圖和附表清單
主要符號(hào)對(duì)照表
第一章 引言
    第一節(jié) 選題背景及意義
    第二節(jié) 冠狀病毒的研究簡(jiǎn)史、分類(lèi)和引發(fā)的疾病
        1.2.1 冠狀病毒的研究簡(jiǎn)史
        1.2.2 冠狀病毒的分類(lèi)
        1.2.4 冠狀病毒引起的疾病
        1.2.5 冠狀病毒引起的疾病的防治
    第三節(jié) 冠狀病毒的研究概況
        1.3.1 冠狀病毒的基因組結(jié)構(gòu)
        1.3.2 冠狀病毒的生活周期
        1.3.3 冠狀病毒的復(fù)制轉(zhuǎn)錄機(jī)制
        1.3.4 冠狀病毒RTC的組成
    第四節(jié) MERS-CoV nsp5的研究意義
        1.4.1 冠狀病毒nsp5的研究意義
        1.4.2 冠狀病毒nsp5的研究現(xiàn)狀
        1.4.3 冠狀病毒nsp5抑制劑的研究現(xiàn)狀
        1.4.4 冠狀病毒nsp5及其抑制劑研究過(guò)程中的注意點(diǎn)
        1.4.5 MERS-CoV nsp5與N3復(fù)合物結(jié)構(gòu)的研究意義
    第五節(jié) 本課題的研究?jī)?nèi)容與意義
    第六節(jié) 論文結(jié)構(gòu)安排
第二章 MERS-CoV nsp5與抑制劑N3的復(fù)合物晶體制備
    第一節(jié) MERS-CoV nsp5的基本信息
        2.1.1 MERS-CoV nsp5的基因序列
        2.1.2 MERS-CoV nsp5的生物化學(xué)信息
        2.1.3 MERS-CoV nsp5折疊情況預(yù)測(cè)
        2.1.4 MERS-CoV nsp5的同源蛋白分析
        2.1.5 小結(jié)
    第二節(jié) MERS-CoV nsp5基因的克隆與表達(dá)載體的優(yōu)化
        2.2.1 MERS-CoV nsp5基因的獲取
        2.2.2 表達(dá)系統(tǒng)的選擇
        2.2.3 表達(dá)載體的選擇
        2.2.4 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    第三節(jié) MERS-CoV nsp5重組蛋白的表達(dá)與純化
        2.3.1 MERS-CoV nsp5重組蛋白的表達(dá)
        2.3.2 MERS-CoV nsp5重組蛋白的純化
    第四節(jié) MERS-CoV nsp5蛋白的晶體生長(zhǎng)與初步數(shù)據(jù)收集
        2.4.1 蛋白質(zhì)結(jié)晶的基本原理
        2.4.2 MERS-CoV nsp5結(jié)晶條件的初步篩選和優(yōu)化嘗試
        2.4.3 MERS-CoV nsp5與N3復(fù)合物晶體的生長(zhǎng)與優(yōu)化
第三章 MERS-CoV nsp5-N3復(fù)合物的結(jié)構(gòu)功能研究
    第一節(jié) 結(jié)構(gòu)解析原理簡(jiǎn)介
        3.1.1 相位問(wèn)題的存在
        3.1.2 常用結(jié)構(gòu)解析方法簡(jiǎn)介
    第二節(jié) MERS-CoV nsp5-N3復(fù)合物的結(jié)構(gòu)解析
        3.2.1 數(shù)據(jù)收集和處理
        3.2.2 結(jié)構(gòu)解析過(guò)程
    第三節(jié) MERS-CoV nsp5與N3復(fù)合物的結(jié)構(gòu)分析
        3.3.1 MERS-CoV nsp5與N3的總體結(jié)構(gòu)
        3.3.2 MERS-CoV nsp5與N3的結(jié)合情況分析
    第四節(jié) N3分子抑制MERS-CoV nsp5的酶活驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)
        3.4.1 MERS-CoV nsp5的活性檢測(cè)原理
        3.4.2 MERS-CoV nsp5的酶活實(shí)驗(yàn)方法
        3.4.3 N3對(duì)MERS-CoV nsp5的抑制活性
        3.4.4 小結(jié)
第四章 SARS-CoV nsp13的晶體學(xué)研究
    第一節(jié) SARS-CoV nsp13的研究進(jìn)展及意義
        4.1.1 SARS-CoV nsp13的功能研究進(jìn)展
        4.1.2 SARS-CoV nsp13結(jié)構(gòu)生物學(xué)研究的意義
    第二節(jié) SARS-CoV nsp13重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        4.2.1 SARS-CoV nsp13基本信息分析
        4.2.2 SARS-CoV nsp13表達(dá)載體的選擇
        4.2.3 SARS-CoV nsp13表達(dá)載體的構(gòu)建
    第三節(jié) pGEX-6p-1-nsp13克隆的蛋白表達(dá)、純化與結(jié)晶嘗試
        4.3.1 pGEX-6p-1-nsp13克隆的蛋白表達(dá)與純化
        4.3.2 pGEX-6p-1-nsp13野生型和突變體蛋白結(jié)晶嘗試
    第四節(jié) pET-28a-nsp13克隆的蛋白表達(dá)、純化與結(jié)晶
        4.4.1 pET-28a-nsp13克隆的蛋白表達(dá)與純化
        4.4.2 pET-28a-nsp13蛋白的結(jié)晶
    第五節(jié) pET-28a'-nsp13克隆的蛋白表達(dá)、純化與結(jié)晶
        4.5.1 pET-28a'-nsp13克隆的蛋白表達(dá)與純化
        4.5.2 pET-28a'-nsp13蛋白的結(jié)晶
    第六節(jié) pET-28a-6×His-nsp13克隆的蛋白晶體制備與數(shù)據(jù)收集
        4.6.1 pET-28a-6×His-nsp13克隆的蛋白表達(dá)與純化
        4.6.2 pET-28a-6×His-nsp13蛋白的結(jié)晶
        4.6.3 pET-28a-6×His-nsp13蛋白質(zhì)晶體的數(shù)據(jù)收集和處理
第五章 結(jié)論
附錄A MERS-CoV nsp5的編碼堿基與氨基酸序列
附錄B SARS-CoV nsp13的編碼堿基與氨基酸序列
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果



本文編號(hào)：3959266