發(fā)布時(shí)間：2024-02-24 00:37

　　背景和目的：心肌細(xì)胞(Cardiomyocytes,CMs)凋亡是多種心血管疾病的重要病理生理機(jī)制之一。microRNA是真核生物中一種長(zhǎng)度約為22個(gè)核苷酸大小、參與基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的非編碼單鏈小分子RNA，可特異性識(shí)別靶信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)的3’-非編碼區(qū)(3’-UTR)并與之結(jié)合，從而降解靶mRNA、抑制翻譯，發(fā)揮其對(duì)基因的轉(zhuǎn)錄后表達(dá)調(diào)控，調(diào)節(jié)重要的細(xì)胞活動(dòng)，參與眾多疾病的病理生理過(guò)程。在眾多微小RNA(microRNA,miRNA)中，微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)不僅在心血管系統(tǒng)中呈高表達(dá)，而且還在許多心血管疾病如心肌梗死、心力衰竭、心臟肥大上呈差異性表達(dá)，參與各種心血管疾病的病理生理分子機(jī)制。迄今為止，研究發(fā)現(xiàn)miR-21介導(dǎo)的心血管效應(yīng)的靶基因有四個(gè)，分別是程序性細(xì)胞死亡因子4(PDCD4)，磷酸脂酶-張力蛋白同源物(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome10,PTEN)，Sprouty1(SPRY1)和Sprouty2(S...

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要試劑
        2.1.3 主要儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 器材的滅菌、去RNA酶處理
        2.2.2 相關(guān)液體的配制
        2.2.3 乳鼠心肌細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定
        2.2.4 PGC-FU-microRNA-21-GFP慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.5 實(shí)驗(yàn)分組
        2.2.6 pGC- FU-microRNA-21-GFP慢病毒載體轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞
        2.2.7 利用 TNF-α建立心肌細(xì)胞凋亡模型
        2.2.8 心肌細(xì)胞總RNA提取及檢測(cè)總RNA的濃度及純度
        2.2.9 qRT-PCR測(cè)定各組心肌細(xì)胞中microRNA-21及PTEN mRNA的表達(dá)
        2.2.10 心肌細(xì)胞總蛋白的提取及測(cè)定蛋白濃度
        2.2.11 Westernblot法檢測(cè)心肌細(xì)胞的PTEN/AKT/FOXO3a通路蛋白的表達(dá)
        2.2.12 心肌細(xì)胞增值及凋亡的檢測(cè)
        2.2.13 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
第3章 結(jié)果
    3.1 乳鼠心肌細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn)及免疫鑒定結(jié)果
    3.2 構(gòu)建 PGC-FU-microRNA-21-GFP慢病毒表達(dá)載體并鑒定
    3.3 PGC-FU- microRNA-21-GFP慢病毒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染入心肌細(xì)胞的結(jié)果
    3.4 qRT-PCR法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞中 microRNA-21和PTEN mRNA的表達(dá)及Westernblot法檢測(cè)PTEN/AKT/FOXO3a通路蛋白的表達(dá)
        3.4.1 qRT-PCR法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞中microRNA-21和PTEN mRNA的表達(dá)
        3.4.2 Westernblot法檢測(cè)PTEN/AKT/FOXO3a通路蛋白的表達(dá)
    3.5 Hoechst33342/PI及Annexin V-FITC法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡率
        3.5.1 Annexin V-FITC法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡率
        3.5.2 Hoechst33342/PI法檢測(cè)各組心肌細(xì)胞凋亡率
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻(xiàn)



本文編號(hào)：3908234