目的建立一種基于顏色判定的快速、靈敏、簡便的檢測生殖支原體(MG)感染的環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增(LAMP)方法。方法使用PrimerExplorer V5軟件依據(jù)gap基因保守區(qū)域設(shè)計4條特異性MG等溫擴(kuò)增引物,通過優(yōu)化體系dNTPs、MgSO₄濃度,建立一種基于羥基萘酚藍(lán)(HNB)作為結(jié)果判讀指示劑的MG等溫擴(kuò)增方法,進(jìn)行靈敏度、特異性檢測并與普通PCR比較;對30份性病門診病例標(biāo)本進(jìn)行LAMP、RT-PCR和普通PCR檢測,并進(jìn)行比較分析。結(jié)果建立的LAMP方法對8種常見支原體以及8種泌尿生殖道常見病原菌擴(kuò)增均為陰性,特異性度為100%。對于MG ATCC 33530標(biāo)準(zhǔn)菌株核酸的檢測限約為10²copies,與MG普通PCR一致,比MGRT-PCR檢測限(10 copies)低一個數(shù)量級。30份臨床標(biāo)本使用LAMP、普通PCR和RT-PCR方法的MG陽性檢出率分別為16.7%,16.7%和20.0%。結(jié)論建立的MG LAMP檢測方法靈敏、特異且操作簡便,可在基層推廣應(yīng)用。

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【文章目錄】：
材料與方法
    1 材料
        1.1 細(xì)菌和病毒株
        1.2 標(biāo)本
    2 方法
        2.1 LAMP引物設(shè)計
        2.2 LAMP體系優(yōu)化
        2.3 LAMP體系、條件及結(jié)果判定
        2.4 LAMP靈敏度、特異度和檢出限測定
        2.5 標(biāo)本檢測
        2.6 統(tǒng)計學(xué)分析
結(jié) 果
    1 LAMP體系優(yōu)化
    2 LAMP的靈敏度和特異度
    3 LAMP檢測限
    4 臨床標(biāo)本檢測結(jié)果
討 論



本文編號：3872660