目的通過(guò)ELISA相加試驗(yàn)和狂犬病毒(Rabies virus,RV)逃逸突變?cè)囼?yàn)對(duì)一株人源抗狂犬病病毒單克隆抗體(human anti-rabies virus monoclonal antibody,Ab1)進(jìn)行抗原表位分析。方法將已知表位的對(duì)照抗體(CR57和CR4098)和Ab1進(jìn)行ELISA相加試驗(yàn);以及對(duì)RV逃逸株氨基酸突變位點(diǎn)分析進(jìn)一步驗(yàn)證Ab1針對(duì)的抗原表位,用小鼠中和試驗(yàn)(mouse neutralization test,MNT)分析Ab1的體內(nèi)抗狂犬病病毒中和活性。結(jié)果 Ab1和CR57可同時(shí)與RV結(jié)合;與CR4098存在競(jìng)爭(zhēng),Ab1的逃逸株在氨基酸位點(diǎn)333、336發(fā)生突變,MNT檢測(cè)體內(nèi)中和活性為550.32 IU/mg,MNT和快速熒光灶抑制試驗(yàn)(rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)結(jié)果基本一致。結(jié)論該抗體針對(duì)III號(hào)抗原表位且具有較高的抗狂犬病病毒中和活性。

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 毒種、細(xì)胞
    1.2 載體
    1.3 參照抗體及引物
    1.4 主要試劑及儀器
    1.5 ELISA相加試驗(yàn)
        1.5.1 測(cè)定參照抗體和人源抗狂犬病病毒單克隆抗體的飽和曲線
        1.5.2 相加指數(shù)(AI)的測(cè)定
    1.6 狂犬病毒逃逸突變?cè)囼?yàn)
        1.6.1 狂犬病毒逃逸株的獲得
        1.6.2 狂犬病毒逃逸株RNA的提取、cDNA的合成和PCR擴(kuò)增狂犬病毒糖蛋白
        1.6.3 狂犬病毒逃逸株氨基酸突變位點(diǎn)分析
    1.7 人源抗狂犬病病毒單克隆抗體(Ab1)體內(nèi)中和活性驗(yàn)證
        1.7.1 病毒懸液毒力的預(yù)測(cè)
        1.7.2 中和活性測(cè)定
    1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 參照抗體(CR57和CR4098)與抗體(Ab1)的飽和曲線的測(cè)定
    2.2 抗體結(jié)合位點(diǎn)分析
    2.3 狂犬病毒糖蛋白的擴(kuò)增及鑒定
    2.4 Ab1逃逸株氨基酸突變位點(diǎn)分析
    2.5 體內(nèi)中和活性驗(yàn)證
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