目的建立和優(yōu)化鈣黃綠素-AM(Calcein-AM)和碘化丙啶(propidium iodide,PI)雙染法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測γδT細(xì)胞細(xì)胞毒活性的方法。方法利用Calcein-AM標(biāo)記靶細(xì)胞,然后與效應(yīng)細(xì)胞共孵育24 h,結(jié)束后加入PI,最后流式細(xì)胞術(shù)檢測;通過BD公司絕對細(xì)胞計(jì)數(shù)管驗(yàn)證上述流程的穩(wěn)定性和可靠性。結(jié)果 Calcein-AM能在較低濃度(0.1⁰.5μmol/L)下對靶細(xì)胞在寬密度范圍(0.1¹0)×106/ml內(nèi)進(jìn)行很好標(biāo)記,而且24 h內(nèi)對細(xì)胞活率無影響,同時(shí)還能與未標(biāo)記細(xì)胞進(jìn)行很好的區(qū)分;整個(gè)流程具有很好的穩(wěn)定性和可靠性。結(jié)論建立并優(yōu)化了Calcein-AM/PI雙染法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測γδT細(xì)胞細(xì)胞毒效應(yīng)的方法,本方法除操作簡單、重復(fù)性好、靈敏度高外,還能更好的區(qū)分死亡細(xì)胞的來源。

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要試劑和儀器
    1.2標(biāo)本來源和γδT細(xì)胞培養(yǎng)
    1.3 Calcein-AM標(biāo)記靶細(xì)胞
    1.4 細(xì)胞收集、PI染色和流式檢測標(biāo)準(zhǔn)操作程序
    1.5 γδT細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒效應(yīng)檢測
    1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 Calcein-AM工作濃度與靶細(xì)胞密度相關(guān)性分析
    2.2 靶細(xì)胞平均熒光強(qiáng)度時(shí)間動力學(xué)變化特征性分析
    2.3 流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性分析
    2.4 γδT細(xì)胞對Calcein-AM標(biāo)記靶細(xì)胞殺傷功能檢測
3 討論



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