潛伏性結核感染阻礙了宿主免疫系統(tǒng)對病原體的根除導致其成為結核桿菌主要儲存庫和結核病防治的障礙,因此診斷和預防潛伏性結核感染是如今結核病防治的關鍵。一組由休眠生存調節(jié)子(DosR)編碼的抗原對于結核桿菌在宿主體內(nèi)持續(xù)存在至關重要。近年來國內(nèi)外研究顯示出DosR抗原在潛伏感染的診斷和新型抗結核疫苗研發(fā)方面潛力巨大。本研究所選擇的抗原Rv1737c是DosR調節(jié)子的一種,主要由潛伏期的結核桿菌表達,目前國內(nèi)外關于該抗原的報道較少,大部分功能未知。目的:探索DosR抗原Rv1737c在宿主天然免疫和炎癥調節(jié)中的作用及其機制,為新型抗結核疫苗的研究提供實驗基礎。方法:通過基因工程技術構建重組質粒pET30a(+)-Rv1737c,通過蛋白原核表達技術獲得重組蛋白Rv1737c(rRv1737c)。用rRv1737c處理小鼠腹腔巨噬細胞和PMA誘導后的THP-1細胞。利用Western Blot技術和Real-Time PCR技術檢測經(jīng)過rRv1737c刺激后的巨噬細胞各效應分子表達。通過流式細胞術檢測巨噬細胞表面共刺激分子表達,ELISA技術檢測細胞上清中各細胞因子濃度,探索rRv1737c在巨...

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
前言
    1.1 機體對結核桿菌的識別
    1.2 結核感染的T細胞免疫應答
    1.3 潛伏性結核感染
    1.4 結核桿菌的免疫逃避
    1.5 BCG疫苗的局限性和DosR抗原的研究展望
第一章 載體構建和重組蛋白Rv1737c的表達純化
    一、材料與方法
        1.1 主要材料和試劑
        1.2 主要實驗儀器
        1.3 實驗方法與步驟
    二、實驗結果
        2.1 重組質粒pET30a(+)-Rv1737c的構建和鑒定
        2.2 重組蛋白的表達純化和鑒定
    三、討論
第二章 rRv1737c誘導巨噬細胞活化的機制研究
    一、材料與方法
        1.1 主要材料和試劑
        1.2 主要實驗儀器
        1.3 實驗方法與步驟
        1.4 統(tǒng)計學分析
    二、實驗結果
        2.1 rRv1737c誘導小鼠腹腔巨噬細胞聚集和TLR2表達
        2.2 rRv1737c誘導THP-1細胞TLR2表達上調和NF-κB磷酸化增加
        2.3 rRv1737c上調巨噬細胞表面共刺激分子表達
        2.4 rRv1737c誘導炎癥因子分泌
        2.5 rRv1737c誘導IDO1分子表達上調
    三、討論
第三章 rRv1737c的免疫和保護效果評價
    一、材料與方法
        1.1 實驗動物
        1.2 主要實驗材料和試劑
        1.3 主要實驗儀器
        1.4 實驗步驟與方法
        1.5 統(tǒng)計學分析
    二、實驗結果
        2.1 rRv1737c免疫原性
        2.2 rRv1737c對小鼠免疫調節(jié)及其肺部組織病理損傷評價
        2.3 rRv1737c調節(jié)巨噬細胞聚集和表型
        2.4 rRv1737c激活的巨噬細胞在體外實驗中誘導Treg和Th2表型
        2.5 rRv1737c免疫小鼠在高劑量BCG感染后T細胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-4和IL-10水平
        2.6 rRv1737c免疫小鼠的肺部免疫應答
    三、討論
結論
參考文獻
在學期間的研究成果
致謝



本文編號：3864819