潛伏性結(jié)核感染阻礙了宿主免疫系統(tǒng)對病原體的根除導(dǎo)致其成為結(jié)核桿菌主要儲存庫和結(jié)核病防治的障礙,因此診斷和預(yù)防潛伏性結(jié)核感染是如今結(jié)核病防治的關(guān)鍵。一組由休眠生存調(diào)節(jié)子(DosR)編碼的抗原對于結(jié)核桿菌在宿主體內(nèi)持續(xù)存在至關(guān)重要。近年來國內(nèi)外研究顯示出DosR抗原在潛伏感染的診斷和新型抗結(jié)核疫苗研發(fā)方面潛力巨大。本研究所選擇的抗原Rv1737c是DosR調(diào)節(jié)子的一種,主要由潛伏期的結(jié)核桿菌表達,目前國內(nèi)外關(guān)于該抗原的報道較少,大部分功能未知。目的:探索DosR抗原Rv1737c在宿主天然免疫和炎癥調(diào)節(jié)中的作用及其機制,為新型抗結(jié)核疫苗的研究提供實驗基礎(chǔ)。方法:通過基因工程技術(shù)構(gòu)建重組質(zhì)粒pET30a(+)-Rv1737c,通過蛋白原核表達技術(shù)獲得重組蛋白Rv1737c(rRv1737c)。用rRv1737c處理小鼠腹腔巨噬細胞和PMA誘導(dǎo)后的THP-1細胞。利用Western Blot技術(shù)和Real-Time PCR技術(shù)檢測經(jīng)過rRv1737c刺激后的巨噬細胞各效應(yīng)分子表達。通過流式細胞術(shù)檢測巨噬細胞表面共刺激分子表達,ELISA技術(shù)檢測細胞上清中各細胞因子濃度,探索rRv1737c在巨...

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
前言
    1.1 機體對結(jié)核桿菌的識別
    1.2 結(jié)核感染的T細胞免疫應(yīng)答
    1.3 潛伏性結(jié)核感染
    1.4 結(jié)核桿菌的免疫逃避
    1.5 BCG疫苗的局限性和DosR抗原的研究展望
第一章 載體構(gòu)建和重組蛋白Rv1737c的表達純化
    一、材料與方法
        1.1 主要材料和試劑
        1.2 主要實驗儀器
        1.3 實驗方法與步驟
    二、實驗結(jié)果
        2.1 重組質(zhì)粒pET30a(+)-Rv1737c的構(gòu)建和鑒定
        2.2 重組蛋白的表達純化和鑒定
    三、討論
第二章 rRv1737c誘導(dǎo)巨噬細胞活化的機制研究
    一、材料與方法
        1.1 主要材料和試劑
        1.2 主要實驗儀器
        1.3 實驗方法與步驟
        1.4 統(tǒng)計學(xué)分析
    二、實驗結(jié)果
        2.1 rRv1737c誘導(dǎo)小鼠腹腔巨噬細胞聚集和TLR2表達
        2.2 rRv1737c誘導(dǎo)THP-1細胞TLR2表達上調(diào)和NF-κB磷酸化增加
        2.3 rRv1737c上調(diào)巨噬細胞表面共刺激分子表達
        2.4 rRv1737c誘導(dǎo)炎癥因子分泌
        2.5 rRv1737c誘導(dǎo)IDO1分子表達上調(diào)
    三、討論
第三章 rRv1737c的免疫和保護效果評價
    一、材料與方法
        1.1 實驗動物
        1.2 主要實驗材料和試劑
        1.3 主要實驗儀器
        1.4 實驗步驟與方法
        1.5 統(tǒng)計學(xué)分析
    二、實驗結(jié)果
        2.1 rRv1737c免疫原性
        2.2 rRv1737c對小鼠免疫調(diào)節(jié)及其肺部組織病理損傷評價
        2.3 rRv1737c調(diào)節(jié)巨噬細胞聚集和表型
        2.4 rRv1737c激活的巨噬細胞在體外實驗中誘導(dǎo)Treg和Th2表型
        2.5 rRv1737c免疫小鼠在高劑量BCG感染后T細胞分泌IFN-γ、IL-4和IL-4和IL-10水平
        2.6 rRv1737c免疫小鼠的肺部免疫應(yīng)答
    三、討論
結(jié)論
參考文獻
在學(xué)期間的研究成果
致謝



本文編號：3864819