目的探討結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)肽聚糖脫乙酰酶Rv1096對(duì)分枝桿菌與宿主細(xì)胞相互作用的影響。方法利用過(guò)表達(dá)Rv1096基因的重組恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis, MS)_Rv1096,通過(guò)差速離心及胰蛋白酶消化試驗(yàn),確定Rv1096蛋白的亞細(xì)胞定位;通過(guò)氨基酸定點(diǎn)突變聯(lián)合伴刀豆凝集素A(Concanavalin A, ConA)免疫印跡確定Rv1096的O-甘露糖基化位點(diǎn);運(yùn)用刃天青顯色法檢測(cè)MS_Rv1096對(duì)溶菌酶的抵抗力;通過(guò)巨噬細(xì)胞感染試驗(yàn),分析了Rv1096對(duì)恥垢分枝桿菌細(xì)胞內(nèi)存活能力和宿主細(xì)胞炎癥應(yīng)答的影響。結(jié)果確定了Rv1096在重組恥垢分枝桿菌MS_Rv1096中的亞細(xì)胞定位在細(xì)胞壁;發(fā)現(xiàn)Rv1096蛋白含有三個(gè)O-甘露糖基修飾位點(diǎn)(²⁶⁵Thr,²⁶⁶Ser,²⁶⁷Ser);細(xì)胞外測(cè)試結(jié)果表明,Rv1096能增強(qiáng)恥垢分枝桿菌對(duì)溶菌酶的抵抗能力,最低抑菌質(zhì)量濃度...

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細(xì)胞、菌株及質(zhì)粒
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 Rv1096轉(zhuǎn)錄水平的檢測(cè)
    1.4 Rv1096蛋白在MS_Rv1096菌中的亞細(xì)胞定位
    1.5 Rv1096的定點(diǎn)突變及O-甘露糖基化位點(diǎn)的檢測(cè)
    1.6 Rv1096對(duì)溶菌酶敏感性的檢測(cè)
    1.7 THP-1細(xì)胞對(duì)Rv1096存活影響的檢測(cè)
    1.8 THP-1細(xì)胞中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10表達(dá)水平的檢測(cè)
    1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié) 果
    2.1 Rv1096轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達(dá)及亞細(xì)胞定位
    2.2 Rv1096的定點(diǎn)突變及O-甘露糖基化位點(diǎn)
    2.3 Rv1096對(duì)細(xì)菌溶菌酶的敏感性及THP-1細(xì)胞對(duì)Rv1096存活的影響
    2.4 THP-1細(xì)胞TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10表達(dá)水平
3 討 論



本文編號(hào)：3856153