目的探討結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)肽聚糖脫乙酰酶Rv1096對分枝桿菌與宿主細胞相互作用的影響。方法利用過表達Rv1096基因的重組恥垢分枝桿菌(Mycobacterium smegmatis, MS)_Rv1096,通過差速離心及胰蛋白酶消化試驗,確定Rv1096蛋白的亞細胞定位;通過氨基酸定點突變聯(lián)合伴刀豆凝集素A(Concanavalin A, ConA)免疫印跡確定Rv1096的O-甘露糖基化位點;運用刃天青顯色法檢測MS_Rv1096對溶菌酶的抵抗力;通過巨噬細胞感染試驗,分析了Rv1096對恥垢分枝桿菌細胞內(nèi)存活能力和宿主細胞炎癥應答的影響。結(jié)果確定了Rv1096在重組恥垢分枝桿菌MS_Rv1096中的亞細胞定位在細胞壁;發(fā)現(xiàn)Rv1096蛋白含有三個O-甘露糖基修飾位點(²⁶⁵Thr,²⁶⁶Ser,²⁶⁷Ser);細胞外測試結(jié)果表明,Rv1096能增強恥垢分枝桿菌對溶菌酶的抵抗能力,最低抑菌質(zhì)量濃度...

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 細胞、菌株及質(zhì)粒
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 Rv1096轉(zhuǎn)錄水平的檢測
    1.4 Rv1096蛋白在MS_Rv1096菌中的亞細胞定位
    1.5 Rv1096的定點突變及O-甘露糖基化位點的檢測
    1.6 Rv1096對溶菌酶敏感性的檢測
    1.7 THP-1細胞對Rv1096存活影響的檢測
    1.8 THP-1細胞中TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10表達水平的檢測
    1.9 統(tǒng)計學分析
2 結(jié) 果
    2.1 Rv1096轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達及亞細胞定位
    2.2 Rv1096的定點突變及O-甘露糖基化位點
    2.3 Rv1096對細菌溶菌酶的敏感性及THP-1細胞對Rv1096存活的影響
    2.4 THP-1細胞TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10表達水平
3 討 論



本文編號：3856153