寨卡病毒(ZikaVirus,ZIKV),屬于黃病毒科(Flaviviridae)黃病毒屬,是單股正向RNA病毒。2015年,巴西地區(qū)暴發(fā)了重大ZIKV疫情,造成數(shù)百萬人感染,引起了世界各國公共衛(wèi)生部門的高度關(guān)注及警惕。ZIKV病毒感染可能與神經(jīng)和自身免疫系統(tǒng)并發(fā)癥有關(guān),如產(chǎn)前小頭畸形(PM)和格林-巴利綜合征(GBS),給當(dāng)?shù)貛砹藝?yán)重的疾病負(fù)擔(dān)。此外,由于ZIKV與登革病毒(Dengue virus,DENV)、黃熱病毒(Yellow Fever virus,YFV)及基孔肯雅病毒(Chikungunya virus,CHIKV)具有相同的傳播媒介,感染后的早期臨床癥狀非常相似,這給疾病的早期診斷帶來困難。早期及時的有效診斷有利于盡早辨別感染、控制疾病的發(fā)展與流行,因此,針對ZIKV的防控急需建立能區(qū)分鑒定這四種病毒的檢測試劑。目前ZIKV的診斷方法主要有三種:病毒分離培養(yǎng)、血清學(xué)檢測及實時熒光定量 RT-PCR(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)。病毒分離培養(yǎng)是病毒檢測及鑒別的...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級別】：碩士

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第一章 前言
    1 寨卡病毒及其流行情況
        1.1 寨卡病毒
        1.2 寨卡病毒的流行病學(xué)
        1.3 寨卡、登革、黃熱及基孔肯雅病毒鑒別診斷需求
    2 寨卡、登革、黃熱及基孔肯雅病毒檢測方法
        2.1 病毒分離培養(yǎng)與血清學(xué)檢測方法
        2.2 分子生物學(xué)檢測方法
    3 多重實時熒光qRT-PCR
        3.1 基于染料法的多重實時熒光qRT-PCR
        3.2 基于探針法的多重實時熒光qRT-PCR
    4 本文的研究目的、思路及意義
第二章 材料與方法
    1 材料
        1.1 主要儀器
        1.2 菌株和質(zhì)粒
        1.3 滅活病毒
        1.4 試劑與耗材
        1.5 常用溶液的配制
    2 方法
        2.1 引物及探針的設(shè)計
        2.2 核酸模板的制備
        2.3 質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
        2.5 常規(guī)實時熒光qRT-PCR方法
        2.6 統(tǒng)計學(xué)分析
第三章 結(jié)果與分析
    1 單重qRT-PCR體系的篩選與建立
        1.1 ZIKV單重qRT-PCR體系的篩選與建立
        1.2 DENV單重qRT-PCR體系的篩選與建立
        1.3 YFV單重qRT-PCR體系的篩選與建立
        1.4 CHIKV單重qRT-PCR體系的篩選與建立
    2 實時熒光qRT-PCR組合篩選與體系優(yōu)化
        2.1 實時熒光qRT-PCR組合篩選
        2.2 四重qRT-PCR體系優(yōu)化
    3 四重qRT-PCR體系評價
        3.1 四重qRT-PCR體系靈敏度評價
        3.2 四重qRT-PCR體系特異性評價
        3.3 四重qRT-PCR體系重復(fù)性評價
        3.4 四重qRT-PCR體系重疊感染檢測
        3.5 四重qRT-PCR體系對模擬ZIKV標(biāo)本的檢測
第四章 討論
    1 多重PCR篩選策略
    2 多重PCR引物、探針設(shè)計
    3 多重PCR與單重PCR的比較
    4 寨卡、登革、黃熱及基孔肯雅四重PCR的優(yōu)勢
第五章 總結(jié)與展望
    1 總結(jié)
    2 展望
參考文獻(xiàn)
在讀期間的科研成果
致謝



本文編號：3852942