目的研究半乳糖凝集素-1(Gal-1)對金黃色葡萄球菌脂磷壁酸(LTA)誘導Raw264.7細胞NLRP3炎癥小體活化的影響及初步機制。方法采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色(MTT)法檢測不同濃度重組小鼠源半乳糖凝集素-1(rmGal-1)對細胞活力的影響;建立LTA誘導的小鼠巨噬細胞系Raw264.7炎癥模型,分別用rmGal-1和NF-κB抑制劑JSH-23預處理Raw264.7細胞。激光共聚焦顯微鏡觀察細胞內(nèi)P-p65及NLRP3的表達;Western blot法進一步檢測細胞中p65、P-p65、NLRP3、ASC、Caspase-1和Pro-Caspase-1的蛋白表達水平。結(jié)果 rmGal-1濃度0.04μg/ml～0.4μg/ml時對Raw264.7細胞活力無明顯影響;在LTA刺激的Raw264.7巨噬細胞中,內(nèi)源性Gal-1和NLRP3的蛋白表達水平呈時間性依賴增加,并在3 h到達高峰;rmGal-1預處理后顯著抑制P-p65、NLRP3、ASC及Caspase-1表達。同樣地,作為陽性對照,JSH-23預處理后,P-p65、NLRP3、ASC及Caspase-1的表達...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 細胞系
        1.1.2 主要試劑及儀器
    1.2 方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)Raw264.7
        1.2.2 四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT]法檢測rm Gal-1作用下Raw 264.7細胞活力
        1.2.3 建立LTA刺激巨噬細胞的炎癥反應模型
        1.2.4 rmGal-1干預LTA刺激下的巨噬細胞
        1.2.5 JSH-23干預LTA刺激下的巨噬細胞
        1.2.6 激光共聚焦觀察P-p65及NLRP3炎癥小體的表達水平
        1.2.7 蛋白提取和Western blot法檢測相關(guān)蛋白表達
    1.3 統(tǒng)計學處理
2 結(jié)果
    2.1 rmGal-1對Raw264.7 細胞活力的影響
    2.2 LTA誘導Raw246.7巨噬細胞中NF-κB-NLRP3通路活化并促進內(nèi)源性Gal-1高表達
    2.3 rmGal-1和JSH-23預處理后對Raw264.7 巨噬細胞中NF-κB及NLRP3炎癥小體表達的影響
3 討論



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