輪狀病毒是引起嬰幼兒及多種幼齡動(dòng)物腹瀉的主要病原體,其感染是一個(gè)多受體介導(dǎo)的、多步驟的復(fù)雜過程。刺突蛋白VP4對(duì)胰酶敏感,可以被胰酶酶切形成VP8*和VP5*蛋白,進(jìn)而激活輪狀病毒的感染。在輪狀病毒的感染過程中,VP8*與VP5*蛋白分離才能夠暴露出VP5*蛋白的膜融合區(qū)域,進(jìn)而介導(dǎo)輪狀病毒的入胞過程。冰凍電鏡的三維重構(gòu)結(jié)果顯示:胰酶酶切后,VP8*蛋白仍位于VP5*蛋白的頂端,并通過一段柔性肽與插入基座部分的N端α螺旋相連,維持VP4蛋白結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。但是,VP8*與VP5*蛋白相互作用及其在輪狀病毒感染過程中的解離機(jī)制目前尚不明確。本課題組前期研究中發(fā)現(xiàn),重組表達(dá)的羊輪狀病毒VP4*蛋白(aa 26-476)免疫小鼠后可以抑制輪狀病毒感染導(dǎo)致的排毒和腹瀉,并且與天然病毒中的VP4蛋白性質(zhì)類似,可以被胰酶酶切形成VP8*和VP5*蛋白,為我們研究VP8*和VP5*蛋白之間的相互作用及解離機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。我們首先通過分子對(duì)接方法,對(duì)輪狀病毒VP4蛋白的已有結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析,發(fā)現(xiàn)VP8*蛋白在α螺旋之外的區(qū)域與VP5*蛋白可能存在相互作用。在此基礎(chǔ)上,我們進(jìn)一步通過蛋白截短和氨基酸定點(diǎn)突變,...

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞(Abbreviation)
第一章 前言
    1. 輪狀病毒的形態(tài)結(jié)構(gòu)與性質(zhì)概述
    2. 輪狀病毒的基因組概述
    3. 輪狀病毒蛋白的結(jié)構(gòu)與功能概述
        3.1. 輪狀病毒的結(jié)構(gòu)蛋白
        3.2. 輪狀病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白
    4. 輪狀病毒的分類及流行病學(xué)分析
        4.1. 輪狀病毒的分類
        4.2. 輪狀病毒的流行趨勢(shì)
    5. 輪狀病毒的感染機(jī)制
        5.1. 輪狀病毒的吸附
        5.2. 輪狀病毒的內(nèi)吞
        5.3. 輪狀病毒進(jìn)入胞質(zhì)
    6. 本研究目的及意義
第二章 材料與方法
    1. 材料
        1.1. 主要儀器設(shè)備
        1.2. 菌種和質(zhì)粒
        1.3. 病毒和細(xì)胞
        1.4. 常用試劑
    2. 方法
        2.1. 常用試劑及培養(yǎng)基配制
        2.2. 常規(guī)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
        2.3. 常規(guī)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
        2.4. 蛋白純化及性質(zhì)鑒定實(shí)驗(yàn)
        2.5. 密度梯度離心檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
        2.6. ELISA檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
第三章 結(jié)果與分析
    1. VP8^*與VP5^*蛋白相互作用研究體系的建立
        1.1. VP8^*與VP5^*蛋白的表達(dá)純化
        1.2. VP8^*與VP5^*蛋白相互作用檢測(cè)體系的建立
        1.3 小結(jié)
    2. VP8^*與VP5^*蛋白相互作用機(jī)制研究
        2.1. 基于結(jié)構(gòu)分析VP8^*與VP5^*蛋白相互作用
        2.2. VP8^*蛋白N端截短對(duì)VP8^*與VP5^*蛋白相互作用的影響
        2.3. VP8^*與VP5^*蛋白相互作用關(guān)鍵氨基酸的研究
        2.4. 小結(jié)
    3. VP8^*與VP5^*蛋白解離機(jī)制的研究
        3.1. 唾液酸受體對(duì)VP8^*與VP5^*蛋白相互作用的影響
        3.2. 不同pH對(duì)VP8^*與VP5^*蛋白相互作用的影響
        3.3. 胞內(nèi)蛋白酶對(duì)VP8^*與VP5^*蛋白相互作用的影響
        3.4. 受體、pH、蛋白酶聯(lián)合對(duì)VP8^*與VP5^*蛋白相互作用的影響
        3.5. 小結(jié)
第四章 討論
    1. VP8^*與VP5^*蛋白相互作用機(jī)制及其關(guān)鍵氨基酸
    2. VP8^*與VP5^*蛋白解離機(jī)制及其與病毒釋放關(guān)系
    3. ELISA作為相互作用及解離機(jī)制檢測(cè)方法的局限性
第五章 總結(jié)與展望
參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號(hào)：3819886