發(fā)布時(shí)間：2017-05-20 10:05

  本文關(guān)鍵詞：高效經(jīng)濟(jì)型飼養(yǎng)層細(xì)胞制備體系的研究和應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目前廣泛使用的絲裂霉素C（MMC）法制備飼養(yǎng)層（Feeder）細(xì)胞（簡(jiǎn)稱“傳統(tǒng)方法”）有諸多問題有待優(yōu)化：（1）產(chǎn)量低，成本高，消耗大量的人力物力；（2）易出現(xiàn)細(xì)胞增殖抑制不充分；（3）小鼠胚胎成纖維細(xì)胞（MEFs）的生物學(xué)行為易受影響，得到的Feeder細(xì)胞質(zhì)量不高；（4）操作不靈活，易錯(cuò)過最佳處理時(shí)機(jī)等。因此，有必要開發(fā)新的方法，既能單批獲得大量高質(zhì)量的Feeder細(xì)胞，又能保證細(xì)胞增殖被充分抑制。 首先，本研究在傳統(tǒng)方法基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)優(yōu)化，建立了懸浮-貼壁法，它能提高抑制細(xì)胞有絲分裂的效率，同時(shí)，還能篩選出狀態(tài)良好的細(xì)胞作為Feeder，，提高所得Feeder的質(zhì)量。而且，我們無需密切觀察MEFs的生長(zhǎng)密度，不用擔(dān)心錯(cuò)過最佳處理時(shí)間，操作更為靈活方便。 其次，本研究對(duì)懸浮-貼壁法進(jìn)一步優(yōu)化，建立了利用細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)瓶機(jī)CELLSPINSystem快速制備Feeder細(xì)胞的方法。CELLSPIN System的攪拌錘可在電磁場(chǎng)作用下不斷旋轉(zhuǎn)，能使細(xì)胞在懸浮狀態(tài)下與培養(yǎng)基中的MMC充分接觸，可明顯提高M(jìn)MC抑制細(xì)胞增殖的效率，縮短處理時(shí)間；懸浮狀態(tài)下處理細(xì)胞，回收時(shí)無需消化液消化，可減少酶消化帶來的細(xì)胞損傷，最大限度地保持細(xì)胞的良好狀態(tài)；旋轉(zhuǎn)瓶的容積是普通培養(yǎng)瓶/皿的數(shù)倍甚至上百倍，短時(shí)間內(nèi)可處理大量細(xì)胞，在提高Feeder制備效率的同時(shí)，又能明顯降低Feeder細(xì)胞的制備成本。所以，細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)瓶機(jī)法便于人胚胎干細(xì)胞（hESCs）和人誘導(dǎo)型多潛能干細(xì)胞（hiPSCS）的大規(guī)模生產(chǎn)。
【關(guān)鍵詞】：CF-1小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 飼養(yǎng)層細(xì)胞 人胚胎干細(xì)胞 人誘導(dǎo)型多潛能干細(xì)胞 絲裂霉素C
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-6
• 英文縮略詞表6-9
• 第1章 引言9-20
• 1.1 依賴 FEEDER 的培養(yǎng)體系9-13
• 1.1.1 動(dòng)物源性 Feeder 培養(yǎng)體系9-11
• 1.1.2 人源性 Feeder 培養(yǎng)體系11-13
• 1.2 FEEDER-FREE 培養(yǎng)體系，組分從不明確到明確的過程13-17
• 1.2.1 成分不明確的條件培養(yǎng)基體系13
• 1.2.2 成分明確的培養(yǎng)體系13-17
• 1.3 新型生物合成材料構(gòu)建的培養(yǎng)體系17
• 1.4 3D 生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)體系17
• 1.5 存在的問題展望17-20
• 第2章 材料與方法20-29
• 2.1 材料20-21
• 2.1.1 主要儀器和設(shè)備20
• 2.1.2 主要試劑20-21
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法21-29
• 2.2.1 CF-1 MEFs 的原代獲取21
• 2.2.2 CF-1 MEFs 的傳代21-22
• 2.2.3 CF-1 MEFs 的凍存22
• 2.2.4 CF-1 MEFs 的復(fù)蘇22
• 2.2.5 傳統(tǒng)方法 Feeder 細(xì)胞的制備22-23
• 2.2.6 懸浮-貼壁法 Feeder 細(xì)胞的制備( 圖 2.1 )23-24
• 2.2.7 攪拌式細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)瓶機(jī)法 Feeder 細(xì)胞的制備( 圖 2.2 )24-25
• 2.2.8 細(xì)胞計(jì)數(shù)25
• 2.2.9 EdU 檢測(cè)25
• 2.2.10 傳統(tǒng)方法、懸浮-貼壁法和細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)瓶機(jī)法直接貼壁率比較25
• 2.2.11 傳統(tǒng)方法、懸浮-貼壁法和細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)瓶機(jī)法復(fù)蘇率比較25
• 2.2.12 傳統(tǒng)方法、懸浮-貼壁法和細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)瓶機(jī)法存活時(shí)間比較25-26
• 2.2.13 流式細(xì)胞周期 Feeder 細(xì)胞凋亡檢測(cè)26
• 2.2.14 質(zhì)譜法 MMC 殘余量檢測(cè)26
• 2.2.15 Feeder 與 hHF-MSC-iPSCs 共培養(yǎng)26
• 2.2.16 hESC 多能性標(biāo)記物鑒定26-27
• 2.2.17 體外擬胚體形成試驗(yàn)27-28
• 2.2.18 體內(nèi)畸胎瘤形成試驗(yàn)28-29
• 第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-47
• 3.1 原代 CF-1 MEFS 獲得及傳代培養(yǎng)29
• 3.2 傳統(tǒng)方法 FEEDER 細(xì)胞的制備29-31
• 3.3 懸浮-貼壁法 FEEDER 細(xì)胞的制備31-35
• 3.4 攪拌式細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)瓶機(jī)法制備 FEEDER 細(xì)胞35-37
• 3.5 傳統(tǒng)方法、懸浮-貼壁法與細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)瓶機(jī)法對(duì)比試驗(yàn)37-39
• 3.6 流式細(xì)胞周期檢測(cè) FEEDER 細(xì)胞凋亡39-41
• 3.7 質(zhì)譜法 MMC 殘余量檢測(cè)41-43
• 3.8 傳統(tǒng)方法、懸浮-貼壁法和細(xì)胞培養(yǎng)轉(zhuǎn)瓶機(jī)法制備的 FEEDER 細(xì)胞均能很好的支持 HHF-MSC-IPSCS的生長(zhǎng)43-44
• 3.9 HHF-MSC-IPSCS 標(biāo)記物鑒定44
• 3.10 HHF-MSC-IPSCS 多潛能性鑒定44-47
• 第4章 討論47-50
• 第5章 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-57
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果57-58
• 致謝58

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Chuanying Pan;Amy Hicks;Colin E Bishop;;SNL fibroblast feeder layers support derivation and maintenance of human induced pluripotent stem cells[J];遺傳學(xué)報(bào);2010年04期

  本文關(guān)鍵詞：高效經(jīng)濟(jì)型飼養(yǎng)層細(xì)胞制備體系的研究和應(yīng)用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：381288