研究背景和目的:乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV),作為一種對人類健康造成極大危害的病原體,常引起人類急慢性傳染性病毒性肝炎,并最終可逐漸演變成慢性乙型肝炎、肝硬化、終末期肝病以及肝細(xì)胞癌。每年有數(shù)十萬人死于與慢性乙型肝炎相關(guān)聯(lián)的疾病,對全球公共健康造成了巨大的威脅。Ⅰ型干擾素(Interferonα,IFNα),常規(guī)用于慢性乙肝病毒感染患者的治療,通過誘導(dǎo)數(shù)百個干擾素刺激基因(interferon stimulated genes,ISGs)的表達(dá),在抗病毒防御中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。而這些ISGs中就包括泛素特異性蛋白酶USP18(ubiquitin-specific protease 18,USP18),它是Ⅰ型干擾素信號通路的一種負(fù)性調(diào)控因子。在干擾素治療無效的慢性乙肝患者的肝組織中,USP18的表達(dá)水平明顯增高。然而,USP18是否影響HBV持續(xù)性感染以及是否與HBV耐受干擾素有關(guān)聯(lián)尚未完全清楚。因此,本研究的目的在于探索USP18在HBV持續(xù)感染中的作用及其潛在機制。實驗方法:高轉(zhuǎn)wild type USP18(WT-USP18,或簡稱為USP18)...

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
一、前言
    (一) 乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)
        1. HBV的分子生物學(xué)特征
        2. HBV的流行病學(xué)特點
        3. 慢性HBV感染的抗病毒治療
    (二) 干擾素治療HBV低應(yīng)答及USP18對干擾素信號通路影響的國內(nèi)外研究現(xiàn)狀與發(fā)展趨勢
    (三) 研究的技術(shù)路線
二、材料與方法
    材料
        (一) 細(xì)胞系
        (二) 質(zhì)粒
        (三) 熒光定量PCR擴增引物
        (三) 主要試劑
        (四) 常用試劑盒
        (五) 主要耗材
        (七) 主要儀器
        (八) 常用試劑的配制
    方法
        (一) 質(zhì)粒構(gòu)建
        (二) 細(xì)胞培養(yǎng)
        (三) 細(xì)胞鋪板接種及轉(zhuǎn)染
        (四) 總RNA/DNA的抽提和實時熒光定量PCR
        (五) 蛋白免疫印記試驗(Western Blot,WB)
        (六) ELISA
        (七) 雙熒光報告基因檢測
        (八) 免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, CO-IP)
        (九) 統(tǒng)計學(xué)分析
三、結(jié)果
    第一部分 USP18信號通路對HBV感染的影響
        (一) USP18及其無酶活性突變體C64S在細(xì)胞中的表達(dá)
        (二) 過表達(dá)USP18刺激HBV產(chǎn)生但不依賴于其酶活性
        (三) 過表達(dá)USP18抑制IFN誘導(dǎo)的Jak/STAT信號通路
    第二部分 與USP18存在相互作用的HBV病毒蛋白的篩選、鑒定
        (一) HBV各病毒蛋白重組表達(dá)質(zhì)粒的成功構(gòu)建以及蛋白水平的驗證
        (二) 免疫共沉淀(CO-IP)篩選與USP18存在相互作用的HBV病毒蛋白
四、討論
五、結(jié)論
參考文獻(xiàn)
英文縮略詞
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
研究生簡歷



本文編號：3810755