為篩選與結(jié)核分枝桿菌(MTB)的PE25/PPE41和PE35/PPE68兩對(duì)異源二聚體相互作用的宿主蛋白,本研究以這兩對(duì)異源二聚體為誘餌蛋白篩選與其相互作用的宿主蛋白。首先將PCR擴(kuò)增的PE25/PPE41或PE35/PPE68基因串聯(lián)克隆于改造的pc DNA3.1(+)中(在5’端引入了以編碼煙草蝕紋病毒蛋白酶切位點(diǎn)的序列連接的ZZ和Flag標(biāo)簽序列),構(gòu)建誘餌重組質(zhì)粒pcDNA-PE25-PPE41和pc DNA-PE35-PPE68。分別將構(gòu)建的誘餌重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后提取細(xì)胞總蛋白,經(jīng)ZZ和Flag標(biāo)簽蛋白兩步串聯(lián)親和層析釣取宿主蛋白,SDS-PAGE電泳分離后切取差異蛋白膠條進(jìn)行質(zhì)譜分析,結(jié)果顯示,PE25/PPE41鑒定到15個(gè)差異蛋白,PE35/PPE68鑒定到29個(gè)差異蛋白,并分別挑選了與PE25/PPE41和PE35/PPE68相互作用的3個(gè)和7個(gè)差異蛋白,為進(jìn)一步驗(yàn)證與PE25/PPE41和PE35/PPE68直接作用的宿主蛋白及研究其生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 目的蛋白編碼基因的克隆
    1.3 pc DNA-ZF載體的構(gòu)建
    1.4 誘餌重組質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 串聯(lián)親和層析
2 結(jié)果與討論



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