目的建立穩(wěn)定共表達(dá)人sprouty2(hSPRY2)基因和螢光素酶報告基因(luciferase,Luc)的J82人膀胱癌細(xì)胞株,并建立其裸鼠皮下移植瘤模型。方法通過PCR擴(kuò)增hSPRY2及Luc全長基因,并分別構(gòu)建慢病毒表達(dá)載體pCDH-hSPRY2和pLVX-Luc,包裝慢病毒。用兩種病毒上清同時感染人膀胱癌J82細(xì)胞,經(jīng)嘌呤霉素、G418篩選出單克隆細(xì)胞株;采用細(xì)胞活體成像、免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色、Western blot法檢測hSPRY2和Luc基因在單克隆細(xì)胞株中的表達(dá)。J82-hSPRY2/Luc細(xì)胞皮下接種BALB/c裸鼠建立移植瘤模型,通過活體成像檢測腫瘤生長情況。結(jié)果篩選出J82-hSPRY2/Luc人膀胱癌細(xì)胞株,并通過活體成像、免疫熒光染色和Western blot驗證了hSPRY2和Luc基因的共表達(dá);通過活體成像動態(tài)觀察到裸鼠皮下移植瘤的生長情況。結(jié)論成功建立了穩(wěn)定共表達(dá)hSPRY2和Luc基因的J82-hSPRY2/Luc人膀胱癌細(xì)胞株以及可用于活體成像檢測的裸鼠皮下移植瘤模型。

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 h SPRY2基因、Luc基因的擴(kuò)增及序列測定
        1.2.2 慢病毒表達(dá)載體p CDH-h SPRY2和p LVX-Luc的構(gòu)建
        1.2.3 建立穩(wěn)定表達(dá)h SPRY2和Luc的J82-h SPRY2/Luc細(xì)胞系
        1.2.4 活體成像技術(shù)檢測螢光素酶報告基因Luc在單克隆細(xì)胞株中的表達(dá)
        1.2.5 Western blot法檢測h SPRY2和Luc的表達(dá)
        1.2.6 間接免疫熒光檢測h SPRY2在J82-h SPRY2/Luc細(xì)胞中的表達(dá)
        1.2.7 裸鼠皮下移植瘤動物模型的建立
2 結(jié)果
    2.1 慢病毒表達(dá)載體p CDH-h SPRY2-Puro和p LVX-Luc-IRES-Neo的構(gòu)建
    2.2 螢光素酶生物發(fā)光法檢測證明Luc基因在單克隆細(xì)胞成功表達(dá)
    2.3 h SPRY2和Luc J82單克隆細(xì)胞株成功表達(dá)
    2.4 J82-h SPRY2/Luc細(xì)胞共表達(dá)h SPRY2及Luc
    2.5 裸鼠皮下移植瘤模型的建立及活體成像檢測
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