目的：通過(guò)一系列實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)熱帶假絲酵母菌的毒力活性,劃分毒力活性等級(jí),篩選毒力優(yōu)勢(shì)克隆群；借助細(xì)胞生物學(xué)和反轉(zhuǎn)錄等研究手段,比較不同毒力活性代表株感染人膀胱上皮細(xì)胞時(shí)宿主細(xì)胞破壞程度及毒力基因表達(dá)水平的差異,識(shí)別與細(xì)胞損傷相關(guān)的特異毒力因子。本研究工作的完成有助于篩選毒力優(yōu)勢(shì)克隆群,闡明毒力差異的分子基礎(chǔ),為探索熱帶假絲酵母菌致病機(jī)制提供線索,對(duì)其流行病學(xué)檢測(cè)、預(yù)防和治療有重要意義。方法：分離自不同感染部位的熱帶假絲酵母菌經(jīng)培養(yǎng)制備成相應(yīng)濃度的新鮮菌懸液后,分別進(jìn)行毒力表型試驗(yàn),用OD測(cè)定法檢測(cè)熱帶假絲酵母菌聚苯乙烯表面的黏附；用結(jié)晶紫染色(CV)實(shí)驗(yàn)和XTT實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)熱帶假絲酵母菌聚苯乙烯表面生物膜形成及人膀胱癌上皮細(xì)胞(TCC-SUP)表面的黏附和生物膜形成；用顯微鏡評(píng)價(jià)熱帶假絲酵母菌在誘導(dǎo)培養(yǎng)基和非誘導(dǎo)培養(yǎng)基中的菌絲形成能力；用含特定酶底物的平板(牛血清蛋白平板、卵黃瓊脂平板、Tween 80不透明瓊脂板、三丁酸甘油酯瓊脂平板和羊血平板),通過(guò)觀察沉淀環(huán)和溶血環(huán)的形成,分別測(cè)定熱帶假絲酵母菌的天冬氨酰蛋白酶活性、磷脂酶活性、酯酶活性、脂肪酶活性和溶血活性；分析各毒力表型特征間相關(guān)關(guān)系...

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
縮略詞
摘要
ABSTRACT
1 前言
2 不同克隆群熱帶假絲酵母菌毒力表型特征分析
    2.1 材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 聚苯乙烯表面黏附和生物膜形成
        2.2.2 膀胱癌上皮細(xì)胞表面黏附和生物膜形成
        2.2.3 分泌水解酶
        2.2.4 多位點(diǎn)序列分型(MLST)分析
        2.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 熱帶假絲酵母菌黏附
        2.3.2 熱帶假絲酵母菌生物膜形成
        2.3.3 熱帶假絲酵母菌水解酶活性
        2.3.4 熱帶假絲酵母菌各毒力表型特征相關(guān)分析
        2.3.5 不同克隆群熱帶假絲酵母菌毒力表型特征比較
        2.3.6 不同感染部位間熱帶假絲酵母菌毒力表型特征比較
    2.4 討論
3 不同毒力活性熱帶假絲酵母菌毒力基因表達(dá)解析
    3.1 材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 主要試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 脂酶活性、脂肪酶活性和菌絲形成能力評(píng)價(jià)
        3.2.2 毒力基因表達(dá)解析
        3.2.3 熱帶假絲酵母菌誘導(dǎo)細(xì)胞損傷評(píng)價(jià)
        3.2.4 統(tǒng)計(jì)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 酯酶活性和菌絲形成能力
        3.3.2 毒力基因在浮游狀態(tài)、聚苯乙烯表面和TCC-SUP表面表達(dá)水平比較
        3.3.3 毒力基因表達(dá)與其表型相關(guān)分析
        3.3.4 毒力基因表達(dá)和毒力表型特征與細(xì)胞破壞程度相關(guān)分析
    3.4 討論
4 結(jié)論與展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 展望
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
附錄1 熱帶假絲酵母菌菌株信息及毒力表型特征分級(jí)
攻讀碩士學(xué)位期間獲獎(jiǎng)及發(fā)表論文情況
致謝



本文編號(hào)：3781009