目的:瞬時受體電位香草酸亞型1(transient receptor potential vanilloid subfamily member 1,TRPV1)作為體溫的負(fù)調(diào)節(jié)物質(zhì),在體溫升高時表達增多,能起到有效的體溫的負(fù)調(diào)節(jié)作用。TRPV1的表達能被許多種物質(zhì)所調(diào)節(jié),然而,在體條件下,TRPV1的磷酸化是否對TRPV1的表達是否有影響還不清楚。本研究通過在體情況下應(yīng)用蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)拮抗劑H89、蛋白激酶C(Protein kinase C,PKC)拮抗劑Calphostin C和PKC激動劑PMA探討它們對體溫的影響,同時檢測TRPV1和磷酸化TRPV1(p-TRPV1)的活性,下丘腦細胞內(nèi)鈣離子表達水平,進而探討TRPV1的磷酸化對在體條件下TRPV1的表達的影響。除了致熱原LPS致熱這種致熱方式之外,還同時采用了人工氣候室致熱的方式,探討人工氣候室致熱后TRPV1和p-TRPV1表達的變化。研究方法:(1)LPS致熱動物模型將實驗動物隨機分為對照組和LPS致熱組。對LPS組大鼠采用腹腔注射LPS。(2)對LPS致熱動物應(yīng)用PKA抑制劑將動...

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞
第一部分：大鼠經(jīng)LPS致熱后下丘腦PO/AH區(qū)細胞TRPV1通道的磷酸化及機制的研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 主要儀器
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 實驗動物
        2.2 實驗方法
            2.2.1 動物處理及實驗分組
            2.2.2 遙測體溫發(fā)射子體內(nèi)植入及體溫測量
            2.2.3 大鼠側(cè)腦室插管
            2.2.4 Western blotting檢測下丘腦PO/AH區(qū)TRPV1和磷酸化TRPV1表達水平
            2.2.5 下丘腦PO/AH區(qū)細胞內(nèi)PKA、PKC含量的測定
            2.2.6 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 LPS對大鼠體溫的影響
        3.2 Western blotting檢測大鼠在LPS致熱時下丘腦PO/AH區(qū)細胞TRPV1和p-TRPV1的表達
        3.3 大鼠在LPS致熱時下丘腦PO/AH區(qū)細胞PKA含量檢測
        3.4 大鼠在LPS致熱時下丘腦PO/AH區(qū)細胞PKC含量檢測
        3.5 PKA抑制劑H89、PKC抑制劑calphostin C和PKC激動劑PMA對大鼠下丘腦PO/AH區(qū)細胞TRPV1和p-TRPV1表達的影響
        3.6 相關(guān)分析
    4 討論
    5 結(jié)論
第二部分：大鼠經(jīng)熱負(fù)荷后下丘腦PO/AH區(qū)細胞TRPV1通道的磷酸化及機制的探討
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 主要儀器
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 實驗動物
        2.2 實驗方法
            2.2.1 實驗動物處理及分組
            2.2.2 發(fā)射子植入及體溫測量
            2.2.3 Western blotting檢測下丘腦PO/AH區(qū)TRPV1和磷酸化TRPV1表達量
            2.2.4 下丘腦PO/AH區(qū)細胞內(nèi)PKA、PKC含量的測定
            2.2.5 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 熱負(fù)荷條件下，各實驗組大鼠體溫的變化
        3.2 熱負(fù)荷條件下，大鼠PO/AH區(qū)組織中TRPV1和p-TRPV1的表達
        3.3 熱負(fù)荷條件下，各實驗組大鼠PKA含量檢測
        3.4 熱負(fù)荷條件下，各實驗組大鼠PKC含量檢測
        3.5 LPS致熱組與熱負(fù)荷組對比實驗
    4 討論
    5 結(jié)論
第三部分：大鼠下丘腦PO/AH區(qū)細胞TRPV1通道磷酸化對TRPV1通道活性及體溫調(diào)控作用的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 實驗材料
            2.1.1 主要儀器
            2.1.2 主要試劑
            2.1.3 實驗動物
        2.2 實驗方法
            2.2.1 動物處理及分組
            2.2.2 大鼠側(cè)腦室插管
            2.2.3 發(fā)射子植入及體溫測量
            2.2.4 下丘腦PO/AH區(qū)細胞內(nèi)鈣離子濃度測定
            2.1.5 Western blotting檢測下丘腦PO/AH區(qū)磷酸化TRPV1表達量
            2.2.6 統(tǒng)計學(xué)處理
    3 結(jié)果
        3.1 LPS致熱過程中，p-TRPV1的表達水平及細胞內(nèi)鈣離子濃度( [Ca²⁺]_i)的變化
        3.2 PKA抑制劑H89對體溫、p-TRPV1的表達水平及[Ca²⁺]_i的影響
            3.2.1 PKA含量檢測
            3.2.2 PO/AH區(qū)p-TRPV1的表達水平及細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化
            3.2.3 體溫變化
        3.3 PKC抑制劑calphostin C對p-TRPV1的表達水平、[Ca²⁺]_i及體溫的影響
        3.4 PKC激動劑PMA對p-TRPV1的表達水平、[Ca²⁺]_i及體溫的影響
        3.5 PKC抑制劑calphostin C及激動劑PMA對PKC含量的影響
    4 討論
    5 結(jié)論
小結(jié)
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個人簡介



本文編號：3775785