發(fā)布時間：2023-03-29 23:02

　　先天性甲狀腺功能減癥(Congenital Hypothyroidism CH)是一種新生兒常見的內(nèi)分泌代謝性疾病,臨床表現(xiàn)為患兒體格發(fā)育遲滯和智能發(fā)育嚴重障礙。正是因為其高發(fā)病率且可導(dǎo)致機體多個器官的發(fā)育遲滯,所以我們有必要進一步深入研究CH影響器官正常發(fā)育的作用機制。由于倫理學(xué)問題,人類不可能在對CH患者做出診斷后不進行治療而繼續(xù)進行研究,所以在體研究只能依靠CH動物疾病模型。但因為目前世界上缺乏基因敲除的CH大鼠模型,所以研究者獲取CH大鼠模型都是通過藥物誘導(dǎo)的,而這顯然無法真正模擬由于基因突變所造成的CH對大鼠機體發(fā)育的影響,所以通過敲除調(diào)控甲狀腺發(fā)育或者甲狀腺激素合成的相關(guān)基因以構(gòu)建CH大鼠模型成為了CH深入研究的必要前提。本項研究在世界上首次運用CRISPR/cas9基因編輯技術(shù)通過敲除促甲狀腺激素受體(Tshr)基因成功構(gòu)建了CH大鼠疾病模型,為今后最終明確甲狀腺激素在器官發(fā)育過程中的作用機制以及CH的病理機制提供了研究基礎(chǔ)。研究主要內(nèi)容:一、目的質(zhì)粒的構(gòu)建和RNA體外轉(zhuǎn)錄:將pX330-U6-Chimeric_BB-CBh-hSpCas9質(zhì)粒(add...

【文章頁數(shù)】：58 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
英文縮略詞表
第1章 引言
    1.1 概述
    1.2 CH治療的研究進展與存在的問題
    1.3 CH動物模型存在的問題
    1.4 基因編輯技術(shù)的選擇問題
第2章 目的質(zhì)粒的構(gòu)建，轉(zhuǎn)染細胞效率驗證及體外轉(zhuǎn)錄
    2.1 材料和方法
        2.1.1 主要實驗試劑
        2.1.2 實驗方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 目的載體的構(gòu)建
        2.2.2 BRL細胞轉(zhuǎn)染實驗
        2.2.3 gRNA和cas9RNA體外轉(zhuǎn)錄
    2.3 討論
第3章 受精卵顯微注射和移植
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實驗材料
        3.1.2 實驗方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 受精卵與假孕母鼠準備
        3.2.2 受精卵顯微注射和移植
    3.3 討論
第4章 基因型鑒定及脫靶情況分析
    4.1 材料與方法
        4.1.1 實驗材料
        4.1.2 實驗方法
    4.2 實驗結(jié)果
        4.2.1 基因型分析
        4.2.2 脫靶情況分析
    4.3 討論
第5章 表型觀察及激素測定
    5.1 材料與方法
        5.1.1 實驗材料
        5.1.2 實驗方法
    5.2 結(jié)果
        5.2.1 體重
        5.2.2 T4,T3,TSH激素檢測
    5.3 討論
第6章 結(jié)論與展望
    6.1 結(jié)論
    6.2 進一步工作的方向
致謝
參考文獻
攻讀學(xué)位期間的研究成果
綜述
    參考文獻



本文編號：3774671