一、目的 本實(shí)驗(yàn)采用脂多糖(LPS)刺激體外培養(yǎng)的人氣道上皮細(xì)胞建立氣道上皮炎癥反應(yīng)模型,檢測(cè)連環(huán)素p120(簡(jiǎn)稱p120)蛋白的表達(dá)變化、NF-kB信號(hào)通路的活化及其下游靶基因IL-8的表達(dá)變化,初步探討人體氣道炎癥發(fā)生的分子機(jī)制。 二、方法 根據(jù)MTT結(jié)果及本實(shí)驗(yàn)室前期研究,選取20μg/ml LPS作為致炎因子處理培養(yǎng)的人氣道上皮細(xì)胞；運(yùn)用免疫熒光、細(xì)胞核漿分離提取蛋白及Western blot技術(shù)檢測(cè)刺激前后p120、抑制蛋白IkBa及NF-kB亞基p65蛋白表達(dá)的改變及p65是否發(fā)生核內(nèi)轉(zhuǎn)位；運(yùn)用ELISA和熒光實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)分別檢測(cè)IL-8表達(dá)量的改變；運(yùn)用瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及特異性siRNA技術(shù)以增強(qiáng)或敲低細(xì)胞中p120的表達(dá),進(jìn)一步驗(yàn)證p120與NF-kB信號(hào)通路之間的關(guān)系。 三、結(jié)果 Ⅰ.Western blot、熒光實(shí)時(shí)定量PCR及免疫熒光染色證實(shí)p120存在于人氣道上皮細(xì)胞中,而且,與對(duì)照組比較,LPS刺激后p120蛋白表達(dá)下調(diào)。 Ⅱ.細(xì)胞核漿分離提蛋白及Western blot技術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)LPS刺激人氣道上皮細(xì)胞后,NF-κB信號(hào)通路活化——NF-κB p65總蛋白表...

【文章頁數(shù)】：92 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

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主要縮略詞表
中文摘要
Abstract
第一部分 脂多糖誘導(dǎo)氣道炎癥反應(yīng)中連環(huán)素pl20對(duì)NF-kB信號(hào)通路的影響
    前言
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 氣道炎癥中pl20調(diào)控的NF-kB活化部分依栽RhoGTP酶家族蛋白R(shí)ho A
    前言
    材料和方法
    結(jié)果
    討論
    參考文獻(xiàn)
綜述一
    參考文獻(xiàn)
綜述二
    參考文獻(xiàn)
附錄
致謝



本文編號(hào)：3759967