目的為減輕實驗者用磁珠提取腎小球的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),對傳統(tǒng)的心臟灌注腎臟提取方法進(jìn)行改良。方法結(jié)扎遠(yuǎn)端腹主動脈及下腔靜脈,結(jié)扎腸系膜上動脈和腹腔動脈,以減少磁珠分流。將磁珠工作液經(jīng)靜脈留置針灌注腎臟。加入相應(yīng)體積膠原酶A,通過100?μm篩網(wǎng)2次,加入蛋白裂解液,離心裂解吸出含蛋白上清進(jìn)行腎小球蛋白的純化、定量。結(jié)果與傳統(tǒng)的心臟灌注腎臟提取方法比較,改良胸主動脈灌注腎臟提取腎小球方法磁珠用量僅為原來的1/35～1/40。在獲取相同的蛋白情況下,提取腎小球的最佳濃度為4×10~6磁珠/ml,磁珠用量為20?ml。通過該方法灌注分離的腎小球完整,純度為（95.7±2.3）%。結(jié)論改良的胸主動脈灌注腎臟是一種簡單經(jīng)濟(jì)實用磁珠提取腎小球的實驗方法,可以快速獲取大量完整的腎小球,蛋白質(zhì)甚至RNA,為腎小球本身的研究提供新的技術(shù)支持。 

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實驗動物
    1.2 實驗方法
        1.2.1 經(jīng)胸主動脈行腎臟磁珠灌流術(shù)
        1.2.2 摘取腎臟和磁珠收集腎小球
        1.2.3 去除磁珠
        1.2.4 腎小球蛋白的純化和濃度的定量
        1.2.5 腎小球分離效果的觀察
        1.2.6 檢測不同濃度磁珠提取的腎小球蛋白濃度
    1.3 統(tǒng)計學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 腎小球分離效果
        2.1.1 萬能顯微鏡下的觀察結(jié)果
        2.1.2 HE染色顯示的腎小球的分離結(jié)果
        2.1.3 掃描電鏡顯示的腎小球的分離結(jié)果
    2.2 不同濃度磁珠濃度提取小鼠腎小球蛋白濃度比較
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]湖南省慢性腎臟病流行病學(xué)調(diào)查[J]. 李燕,楊海蓉,賀艷,劉宏敏,諶平,王湘川.  湖南師范大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版). 2018(03)
[2]中國成人及老年人群慢性腎臟病患病率Meta分析[J]. 王善志,朱永俊,唐文莊,劉楠,葉鳳,李國銓,王敏,王華南,鄭顏萍,梁海琴,鐘良寶.  中國老年學(xué)雜志. 2017(21)



本文編號：3729058