轉化生長因子β1（transforming growth factorβ,TGF-β1）通路是介導上皮-間質轉化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）發(fā)生的最重要信號通路之一,廣泛參與了胚胎發(fā)育、腫瘤轉移和纖維化等生理或病理過程。Toll樣受體4（Toll like receptor 4,TLR4）是最早發(fā)現(xiàn)的TLRs家族成員,除了對機體天然和獲得性免疫反應起到調控作用外,在腫瘤轉移和纖維化過程中也發(fā)揮了重要作用。然而,TLR4信號通路對TGF-β介導的EMT是否具有調控作用及可能的分子機制尚未完全明確。在本研究中,TGF-β1可下調人呼吸道上皮細胞系A549細胞中上皮標志物E-cadherin的表達,上調間質標志物N-cadherin、Vimentin的表達,且誘導細胞向間質細胞形態(tài)轉變。而給予TLR4激動劑LPS刺激后,TGF-β1誘導A549細胞EMT的作用明顯減弱,提示TLR4激活可抑制TGF-β1介導的EMT。通過深度測序和q RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),LPS刺激可顯著上調A549細胞中mi R-181b的表達。染色質免疫沉淀（Chroma... 

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【學位級別】：碩士

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中文摘要
Abstract
第1章 緒論
第2章 綜述
    2.1 miRNA簡介
        2.1.1 miRNA的發(fā)現(xiàn)
        2.1.2 miRNA的生物學特性
        2.1.3 miRNA的生物合成及作用機制
    2.2 miRNA在IPF中的表達調控
        2.2.1 let-7d與IPF
        2.2.2 miR-21與IPF
        2.2.3 miR-200與IPF
        2.2.4 miR-155與IPF
        2.2.5 miR-29與IPF
    2.3 miRNA與IPF的治療
第3章 資料和方法
    3.1 實驗材料
        3.1.1 主要實驗器材（見表 3.1）
        3.1.2 主要試劑（見表 3.2）
        3.1.3 細胞系
    3.2 實驗方案
        3.2.1 研究LPS刺激對TGFβ1 誘導的EMT的影響
        3.2.2 與TLR4激活相關的miRNAs表達譜
        3.2.3 預測并明確TLR4上調miR-181b的轉錄因子
        3.2.4 過表達miR-181b對上皮-間質轉化（EMT）的影響
        3.2.5 預測并明確miR-181b的作用靶點
    3.3 實驗方法
        3.3.1 細胞培養(yǎng)及傳代
        3.3.2 熒光報告基因檢測（luciferase assay）
        3.3.3 染色質免疫沉淀（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP） 實驗
        3.3.4 miR-181b轉染A549細胞
        3.3.5 Trizol法提取總RNA及RNA完整性檢測
        3.3.6 qRT-PCR檢測miRNA和mRNA表達
        3.3.7 Western Blotting檢測
        3.3.8 細胞免疫熒光染色
        3.3.9 統(tǒng)計學分析
第4章 結果
    4.1 LPS刺激可以減輕TGFβ 1誘導的A549細胞的EMT
    4.2 LPS刺激激活TLR4后引起A549細胞內(nèi)miRNAs變化
    4.3 qRT-PCR驗證TLR4激活后miR-181b表達上調
    4.4 AP1為TLR4上調miR-181b的轉錄因子
    4.5 過表達miR-181b可以減輕TGF-β 誘導的EMT
    4.6 TGFBR1是miR-181b的下游作用靶點
第5章 討論
第6章 結論
參考文獻
作者簡介及在學期間所取得的科研成果
致謝



本文編號：3721736