旨為以原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)、純化新型H7N9禽流感病毒（安徽株）NA蛋白胞外區(qū)片段并制備該蛋白的多克隆抗體。對(duì)新型H7N9禽流感病毒神經(jīng)氨酸酶（Neuraminidase,NA）蛋白胞外區(qū)片段進(jìn)行生物信息學(xué)分析,基于大腸桿菌密碼子偏愛性進(jìn)行密碼子優(yōu)化并合成該蛋白編碼基因。將構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET28b-tN9（Truncated N9）轉(zhuǎn)化至E. coli BL21（DE3）、E. coli Rosetta和E. coli Arctic Express（DE3）,進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),并進(jìn)行SDS-PAGE鑒定。選取E. coli BL21（DE3）重組菌進(jìn)行放大培養(yǎng)、IPTG誘導(dǎo)并對(duì)誘導(dǎo)產(chǎn)物進(jìn)行鎳柱純化、SDS-PAGE分析和質(zhì)譜鑒定。將純化的重組蛋白免疫新西蘭大白兔,制備多克隆抗體,以Western blotting和間接ELISA法檢測(cè)抗體特異性及效價(jià)。成功表達(dá)并純化目標(biāo)蛋白,Western blotting顯示制備的多克隆抗體能特異性識(shí)別重組蛋白和新型H7N9禽流感病毒（上海株）,間接ELISA方法檢測(cè)制備的多克隆抗體,效價(jià)為1∶256 000。利用原核表達(dá)系統(tǒng)高效表達(dá)并純化了tN9蛋白,制... 

【文章頁數(shù)】：9 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 新型H7N9禽流感病毒NA蛋白胞外區(qū)片段的生物學(xué)信息分析
        1.2.2目標(biāo)基因表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.3目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)、親和純化與質(zhì)譜鑒定
        1.2.4 動(dòng)物免疫與多克隆抗體制備
        1.2.5 Western blotting法鑒定多抗特異性
        1.2.6 間接ELISA法測(cè)定多克隆抗體的效價(jià)
2 結(jié)果
    2.1 NA蛋白胞外區(qū)片段生物信息學(xué)分析結(jié)果
    2.2 pET28b-tN9重組表達(dá)載體構(gòu)建
    2.3 目的蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)
    2.4 目的蛋白親和純化與質(zhì)譜鑒定
    2.5 Western blotting法鑒定多抗特異性
    2.6 多克隆抗體的效價(jià)檢測(cè)
3 討論
4 結(jié)論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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