發(fā)布時間：2022-12-10 01:50

　　在我國尤其是北方城市,心臟血管疾病有著非常高的發(fā)病率和致死率,這和環(huán)境及民眾的飲食結(jié)構(gòu)有很大關系。動脈粥樣硬化是以冠心病、腦梗死等心血管疾病的主要誘因,主要由脂質(zhì)代謝紊亂造成。動脈粥樣硬化不僅和脂質(zhì)代謝、炎癥反應相關,而且和高膽固醇血癥的關系十分密切。動脈粥樣硬化屬于慢性病,誘發(fā)因素較多,一旦發(fā)病嚴重時可以致命。1973年人們在超低密度脂蛋白中發(fā)現(xiàn)了載脂蛋白E在血漿脂蛋白代謝中具有重要作用,可以調(diào)節(jié)酶活性、運輸脂質(zhì)、引導血漿脂蛋白同細胞表面受體結(jié)合。ApoE的多態(tài)性不僅可以影響其結(jié)合脂質(zhì)能力,而且和神經(jīng)退化疾病、心血管動脈粥樣硬化疾病有相關性,且不同亞型對疾病的易感性也不同。ApoE和疾病的關系在動物身上研究較為廣泛,如apoE基因敲除鼠和apoE基因敲除兔的膽固醇水平都顯著升高,可以發(fā)展為高脂蛋白血癥、動脈粥樣硬化。但是這些轉(zhuǎn)基因動物模型也并是完美的動脈粥樣硬化模型。鼠模型體積過小,不適合采樣和外科手術操作,而且脂蛋白以HDL為主,對動脈粥樣硬化有保護作用;兔子模型雖然易于操作,但對飲食敏感,而且缺少肝臟酶活性,長期高膽固醇飲食會導致肝臟中毒,斑塊損傷位置和人類也不同。如果能建立體積... 

【文章頁數(shù)】：73 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
abstract
引言
第一篇 文獻綜述
    第1章 載脂蛋白E基因功能
        1.1 ApoE的多態(tài)性
        1.2 ApoE的結(jié)構(gòu)和功能
        1.3 ApoE在正常脂蛋白代謝中的作用
        1.4 ApoE亞型調(diào)節(jié)脂質(zhì)水平的作用
    第2章 載脂蛋白E和動脈粥樣硬化
        2.1 ApoE和動脈粥樣硬化
        2.2 ApoE基因敲除動物模型
    第3章 基因編輯技術概況
        3.1 基因編輯發(fā)展史
            3.1.1 Cre-lox
            3.1.2 鋅指核酸酶(ZincFingerNucleases)
            3.1.3 TANLENs
        3.2 CRISPR
            3.2.1 CRISPR/Cas:天然免疫系統(tǒng)
            3.2.2 CRISPR/Cas9的應用
            3.2.3 CRISPR/Cas9技術的生物安全性
第二篇 研究內(nèi)容
    第1章 CRISPR/CAS9介導的載脂蛋白E基因敲除豬的建立
        1.1 材料
            1.1.1 細胞系及實驗動物
            1.1.2 質(zhì)粒
            1.1.3 主要試劑及試劑盒
            1.1.4 主要試驗儀器
            1.1.5 所用軟件
        1.2 方法
            1.2.1 sgRNA表達載體的構(gòu)建
            1.2.2 驗證sgRNA切割效率
            1.2.3 挑取單克隆細胞
            1.2.4 篩選陽性克隆
            1.2.4 陽性細胞核移植和胚胎移植
        1.3 結(jié)果
            1.3.1 PX330-sgRNA載體的鑒定
            1.3.2 sgRNA切割效率鑒定
            1.3.3 鑒定apoE基因敲除效率
            1.3.4 陽性克隆細胞篩選
            1.3.5 核移植和胚胎移植
        1.4 討論
        1.5 小結(jié)
    第2章 克隆豬載脂蛋白E鑒定與肝臟表型分析
        2.1 材料
            2.1.1 主要試劑
            2.1.2 實驗儀器
            2.1.3 動物材料
        2.2 方法
            2.2.1 基因型鑒定
            2.2.2 肝臟蛋白檢測
            2.2.3 肝臟脂質(zhì)含量檢測
        2.3 結(jié)果
            2.3.1 克隆豬apoE基因型鑒定
            2.3.2 克隆豬apoE表型鑒定
            2.3.3 肝臟脂質(zhì)含量檢測
            2.3.4 肝臟脂質(zhì)調(diào)節(jié)因子檢測
            2.3.5 肝臟炎癥因子檢測
        2.4 討論
        2.5 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻
導師簡介
作者簡介
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]人和豬、羊、牛肌組織形態(tài)的比較及法醫(yī)學意義[J]. 樓旭鵬,張偉,鄭劍,徐宏,趙峰.  法醫(yī)學雜志. 2016(04)
[2]載脂蛋白E基因多態(tài)性與原發(fā)性高脂血癥中醫(yī)辨證的相關性研究[J]. 蔣衛(wèi)民,唐蜀華,賴仁勝,謝玲,王石.  中國中西醫(yī)結(jié)合雜志. 2006(01)
[3]載脂蛋白E基因敲除小鼠在動脈粥樣硬化研究中的應用[J]. 劉龍濤,張文高,鄭廣娟.  山東生物醫(yī)學工程. 2002(04)
[4]載脂蛋白E基因多態(tài)性對血脂水平的影響及與冠狀動脈狹窄的關系[J]. 李衛(wèi)華,黃德嘉,杜修海,張衛(wèi)澤,胡靜泠.  中國動脈硬化雜志. 2000(01)
[5]載脂蛋白E[J]. 張大高,孫振威.  生命的化學(中國生物化學會通訊). 1987(05)



本文編號：3715813