阿爾茨海默氏�。ˋlzheimer’s disease,AD）是一種神經(jīng)退行性疾病,其高發(fā)人群主要是中老年人,預計到2050年全世界有超過1.315億的癡呆癥患者。AD最重要的病理特征是老年斑和神經(jīng)纖維纏結(jié)（NFTs）,前者是Aβ肽的細胞外聚集體,后者是細胞內(nèi)超磷酸化微管相關(guān)蛋白Tau蛋白的聚集體。AD病因及發(fā)病機制至今尚有爭論,近些年各種假說中最有影響力的是淀粉樣蛋白級聯(lián)假說。該假說認為AD的起始事件是淀粉樣前體蛋白在被分泌酶切割降解過程中產(chǎn)生多的Aβ42,接著引起一系列病理學變化,進而導致AD的發(fā)生。該理論最初認為神經(jīng)元功能障礙和死亡是由總Aβ的含量的神經(jīng)毒性作用導致的,最近有人提出,不僅Aβ肽單體導致神經(jīng)元功能障礙,Aβ肽的低聚形式（2至12個肽的小聚集體）實際上比Aβ高聚形式（例如老年斑）對腦功能有更大的損害。本課題組在前期研究中獲得了兩種抗Aβ42低聚體的單鏈抗體MO6和HT7,分析結(jié)果表明,單鏈抗體MO6和HT7均能特異性識別Aβ42的寡聚體和原纖維形態(tài),且能夠抑制Aβ42的進一步聚集和促進Aβ42聚集體的解聚,對Aβ42產(chǎn)生的神經(jīng)毒性有明顯的抑制作用,但是MO6和HT7對... 

【文章頁數(shù)】：62 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
英文縮略詞
第一章 前言
    1.1. 阿爾茨海默氏病
    1.2. 臨床癥狀和神經(jīng)病理學
    1.3. 淀粉樣前體蛋白（APP）加工的分子機制及Aβ 肽和聚集體的形成
    1.4. 遺傳因素
    1.5. AD的診斷和治療
    1.6. 單鏈抗體（sc Fv）
    1.7. 本論文的研究思路
第二章 Aβ42 及其單鏈抗體的制備
    2.1. 引言
    2.2. 實驗材料
        2.2.1. 菌種
        2.2.2. 試劑
        2.2.3. 儀器
    2.3. 實驗方法
        2.3.1. 編碼單鏈抗體HT7的VH、VL的基因擴增
        2.3.2. 編碼單鏈抗體HT7的VL的DNA片段與原核表達載體的連接
        2.3.3. 編碼單鏈抗體HT7的VH的DNA片段與原核表達載體的連接
        2.3.4. 重組質(zhì)粒的轉(zhuǎn)化
        2.3.5. 陽性菌株篩選及鑒定
        2.3.6. 目的蛋白的誘導表達與純化
        2.3.7. Aβ 的制備
    2.4. 實驗結(jié)果
        2.4.1. 單鏈抗體HT7的VL和VH結(jié)構(gòu)域的表達載體構(gòu)建
        2.4.2. 單鏈抗體HT7及其VL和VH結(jié)構(gòu)域的表達及純化
        2.4.3. Aβ 的制備
    本章小結(jié)
第三章 抗Aβ42 寡聚體特異性單鏈抗體的性質(zhì)與功能分析
    3.1. 引言
    3.2. 實驗材料
        3.2.1. 材料
        3.2.2. 試劑
        3.2.3. 儀器
    3.3. 實驗方法
        3.3.1. 單鏈抗體與四種形態(tài)Aβ42 結(jié)合特異性的分析
        3.3.2. 單鏈抗體對Aβ42 寡聚體（表觀）結(jié)合力的檢測
        3.3.3. 單鏈抗體對Aβ 寡聚體（表觀）親和力的測定
        3.3.4. 單鏈抗體對Aβ42 聚集的抑制作用的分析
        3.3.5. 單鏈抗體抑制Aβ42 對細胞的毒性作用的檢測
        3.3.6. 單鏈抗體與Aβ42 相互作用的分析
    3.4. 實驗結(jié)果
        3.4.1. 單鏈抗體對Aβ42 不同形態(tài)的特異性
        3.4.2. 單鏈抗體對Aβ42 寡聚體的（表觀）結(jié)合力
        3.4.3. 單鏈抗體的（表觀）親和力的測定
        3.4.4. 單鏈抗體對Aβ42 聚集的抑制作用
        3.4.5. 單鏈抗體抑制Aβ42 對細胞的毒性作用
        3.4.6. 單鏈抗體HT7的VH、VL結(jié)構(gòu)域與Aβ42 相互作用分析
    本章小結(jié)
結(jié)論與討論
參考文獻
作者簡介及在學期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]淀粉樣前體蛋白基因的分子遺傳學和分子生物學[J]. 樓蓉,梅品超,朱寧,沈巖.  國外醫(yī)學.遺傳學分冊. 2001(03)



本文編號：3679797