目的:構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌PPE68基因原核表達(dá)質(zhì)粒和真核表達(dá)質(zhì)粒載體,分別在大腸桿菌BL21和小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7中觀察PPE68基因表達(dá)。并將在大腸桿菌BL21中表達(dá)的PPE68蛋白,用親和層析法分離純化后,皮下多點(diǎn)注射法免疫新西蘭大白兔,制備兔抗rPPE68多克隆抗體,為進(jìn)一步探討PPE68蛋白的功能及PPE68重組BCG的構(gòu)建打下基礎(chǔ)。方法:1以結(jié)核分枝桿菌H37Rv基因組DNA為模板,用PCR法擴(kuò)增PPE68基因,將其克隆至pET32a（+）載體中,構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET32a（+）/PPE68,熱休克法轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE及Western blot鑒定。2將結(jié)核分枝桿菌PPE68基因克隆至真核表達(dá)質(zhì)粒pBudCE4.1中,構(gòu)建真核表達(dá)質(zhì)粒pBudCE4.1-PPE68。以真核表達(dá)質(zhì)粒pBudCE4.1-PPE68體外轉(zhuǎn)染小鼠巨噬細(xì)胞株RAW264.7細(xì)胞,通過(guò)RT-PCR及Western-blot法分別在轉(zhuǎn)錄水平及翻譯水平檢測(cè)PPE68基因的表達(dá)。3以純化后重組PPE68蛋白為抗原,與弗氏不完全佐劑等體積混合,采用... 

【文章頁(yè)數(shù)】：57 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 結(jié)核分枝桿菌 PPE68 基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建和表達(dá)及鑒定
    1 材料和方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3 討論
    4 小結(jié)
第二部分 PPE68 真核表達(dá)載體構(gòu)建及細(xì)胞內(nèi)表達(dá)鑒定
    1 材料和方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3 討論
    4 小結(jié)
第三部分 PPE68 蛋白抗血清的制備及鑒定
    1 材料和方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3 討論
    4 小結(jié)
全文總結(jié)
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]原核融合表達(dá)載體的設(shè)計(jì)、構(gòu)建及應(yīng)用[J]. 程琰,毛旭虎,王慶旭,余抒,劉艷青,張曉麗,寧亞蕾,鄒全明.  免疫學(xué)雜志. 2008(06)
[2]結(jié)核性腦膜炎的CT征象及其診斷價(jià)值探討（附45例分析）[J]. 張?chǎng)x,戴燕彬,劉成蔭,劉少偉.  臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2007(04)
[3]結(jié)核分枝桿菌感染中一些重要免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子作用的研究進(jìn)展[J]. 柏雪蓮,傅斌,劉克義.  中國(guó)防癆雜志. 2006(03)
[4]可溶性血管細(xì)胞黏附分子1在肺結(jié)核發(fā)病機(jī)制中的作用和臨床意義[J]. 梁艷,董德瓊,楊渝浩.  中華結(jié)核和呼吸雜志. 2006(04)



本文編號(hào)：3675900