目的:制備與鑒定抗降鈣素基因相關(guān)肽受體（CGRPR）單克隆抗體。方法:構(gòu)建GST-CGRPR胞外區(qū)融合表達(dá)載體,誘導(dǎo)表達(dá)后經(jīng)GST親和層析得到的重組蛋白作為抗原免疫BALB/c小鼠,利用雜交瘤技術(shù)篩選陽(yáng)性細(xì)胞株,通過腹水制備鼠源單克隆抗體,采用ELISA、SDS-PAGE、Western印跡和抗體分型試劑盒等方法進(jìn)行分析鑒定。結(jié)果:純化得到的GST-CGRPR胞外區(qū)融合蛋白純度大于90%,篩選到2株針對(duì)CGRPR的單克隆抗體1F9、1F10,輕、重鏈均分別為κ型、IgG1型,細(xì)胞上清效價(jià)分別為1∶3200、1∶1600,腹水效價(jià)都達(dá)到105,抗體純度均達(dá)到90%以上,且都以線性表位結(jié)合GST-CGRPR,親和力常數(shù)分別為3.95×10^-8、1.49×10^-8mol/L。結(jié)論:獲得2株具有高親和力針對(duì)CGRPR的單克隆抗體,為偏頭痛治療藥物研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來(lái)源】：生物技術(shù)通訊. 2019,30(06)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
    1.2 重組質(zhì)粒構(gòu)建
    1.3 蛋白表達(dá)及純化
    1.4 動(dòng)物免疫
    1.5 雜交瘤細(xì)胞株建立
    1.6 腹水制備及純化
    1.7 抗體亞類鑒定及效價(jià)測(cè)定
    1.8 抗體可變區(qū)基因調(diào)取
    1.9 抗體特異性鑒定
    1.1 0 抗體親和力測(cè)定
2 結(jié)果
    2.1 重組表達(dá)載體構(gòu)建
    2.2 目的蛋白純化
    2.3 單克隆抗體篩選
    2.4 抗體亞型分析及細(xì)胞上清效價(jià)測(cè)定
    2.5 抗體可變區(qū)基因序列分析
    2.6 抗體制備
    2.7 單抗特異性鑒定
    2.8 抗體親和力常數(shù)測(cè)定
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]治療偏頭痛的創(chuàng)新藥物——降鈣素基因相關(guān)肽抑制劑erenumab[J]. 郎豐山,隋忠國(guó),許鵬飛.  中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)刊. 2018(08)
[2]小鼠腹水JWA單克隆抗體的制備鑒定[J]. 李愛萍,陳敏娟,王稀琛,金可心,張紅,周建偉.  藥物生物技術(shù). 2014(02)
[3]靶向G蛋白偶聯(lián)受體的高通量藥物篩選方法[J]. 李靜,謝欣.  國(guó)際藥學(xué)研究雜志. 2012(05)
[4]非競(jìng)爭(zhēng)性ELISA法測(cè)定人源抗HBsAg Fab功能性親和常數(shù)[J]. 鄭大勇,羅榮城,韓煥興.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2004(02)

碩士論文
[1]我國(guó)與全球單克隆抗體藥物產(chǎn)業(yè)的對(duì)比分析及發(fā)展趨勢(shì)預(yù)測(cè)[D]. 李婷婷.山東大學(xué) 2014
[2]人降鈣素受體胞外域的表達(dá)、復(fù)性及活性研究[D]. 沈琴.西北農(nóng)林科技大學(xué) 2014



本文編號(hào)：3643396